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上皮細胞における輸送体膜タンパク質の極性局在機構の分子形態学的解析

上皮细胞转运膜蛋白极性定位机制的分子形态学分析

基本信息

批准号：
13770002
负责人：
鈴木健史
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

頂部細胞膜タンパク質のターゲティングに脂質ラフトが関与していることが近年多く報告されている.そこで,ナトリウムイオン依存型糖輸送体SGLT1の選択的な頂部細胞膜への移送や頂部細胞膜での局在に脂質ラフトが関与している可能性について検討した.このため,生きた細胞内でのSGLT1の動きを観察するために,GFP融合SGLT1をMDCK細胞に導入し安定して発現する株を作製した.この細胞では,コンフルエントの状態になるとSGLT1-GFPは頂部細胞膜のみに局在する.この細胞株を使い,脂質ラフトの主要成分であるコレステロールを除去することにより,SGLT1の頂部細胞膜局在がどのような影響を受けるかを解析した.メチル-β-シクロデキストリン(MCD)処理によって細胞に含まれているコレステロールの急激な除去を行うと,短時間で基底側壁部細胞膜上にもGFPのシグナルが出現し始め細胞膜全周に局在するようになった.この過程を,生きている細胞でタイムラプス観察した結果,MCD処理の影響は15〜30分後から始まり,2時間後には全ての細胞で細胞膜全周に局在するようになった.また,経時的にサンプリングした細胞を蛍光抗体法で解析した結果,SGLT1-GFPが全膜局在する過程におけるタイトジャンクションの染色パターンに変化は見られなかった.このSGLT1-GFPの細胞内局在におよぼすMCDの影響は,培地にコレステロールを添加することによって相殺された.以上の結果は,SGLT1の頂部細胞膜局在にコレステロールラフトが重要な役割を果たしていることを示唆している.

In recent years, there have been many reports on the cell membrane. The cell membrane of the selected part of the dependent glucose delivery system (SGLT1) is transferred to the cell membrane of the cell membrane. In this experiment, the intracellular SGLT1 activity was detected, and the GFP fusion SGLT1 MDCK cell was introduced into the diazepam plant. The cell is in the middle of the cell. The cell membrane is located in the cell. The cell membrane is located in the SGLT1-GFP. The main components of the cell line were isolated from the cell line, and the main components of the cell line were isolated from the cell line. The cell membrane bureau of the SGLT1 cell line was affected by the cell membrane. The whole cell of the cell was detected in the cell of the base wall of the cell after a short period of time when the GFP was detected on the cell membrane of the basal wall of the cell. The whole cell membrane was detected in the cell membrane of the cell wall of the basal membrane. During the whole process, the results of cell cycle monitoring were observed. MCD analysis showed that it started after 15: 30, and the whole cell membrane was monitored after 2: 00. In order to analyze the results of the analysis of the results of the whole film method, the SGLT1-GFP whole film bureau was used to analyze the results of this method. The SGLT1-GFP in the cell is in the shadow of the MCD, so you can add a lot of money to it. As a result of the above results, the membrane Bureau of the SGLT1 Department has shown that it is important to make an important operation.