溶血連鎖球菌の遺伝子操作による毒素遺伝子の発現および機能の解析

通过基因操作分析溶血性链球菌毒素基因的表达和功能

• 批准号: 13770132
• 负责人: 木元 久
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770132/
• 关键词: 溶血性連鎖球菌; ストレプトリジン; NADase; レンサ球菌; 溶血製連鎖球菌

これまで形質転換効率が低く遺伝子操作が困難であったA群溶血レンサ球菌Steptococcus pyogenesにおいて、エレクトロポレーション法を応用し高い効率で再現性良く臨床分離株にも広く適用できる系を開発し、遺伝子破壊やプロモーター検索に応用可能であることを示した。この方法は,これまで遺伝子導入が不可能であったC群溶血レンサ球菌Streptococcus dysgalactiae subup. equisimilis H46Aの形質転換も可能にした。この遺伝子導入系をSLO遺伝子の破壊やプロモーター検索に応用した結果、これまで溶血毒素と考えられていたSLOは溶血にほとんど関与していないことがわかった。また,SLO遺伝子は上流に位置するNADase遺伝子のプロモーターからポリシストロニックに転写されオペロンを形成していることを明らかにした。これらの結果から、SLOは溶血毒素として機能しているのではなく、主としてNADaseのような菌体外に分泌される生理活性物質を宿主細胞に移行させるデリバリーシステムとして機能していることが示唆された。毒素タンパクとしてのNADaseの役割についてはいまだに不明であるが, NADaseは細胞毒性が非常に強く,これまで大腸菌や枯草菌での大量発現系の構築は困難であった。そこで、遺伝子発現を厳格にコントロールできる大腸菌アラビノース代謝オペロンのプロモーターを発現ベクターに用いた結果,NADaseの大量発現に成功した。現在,NADaseの生化学的な性質と毒素としての機能を解析中である。

This makes it difficult to perform genetic manipulation due to its low form change efficiency. The use of the Elektro method in the treatment of Serotype A Streptococcus pyogenes and the development of a system with high efficiency and good reproducibility for a wide range of clinical isolates shows that genetic manipulation and genetic manipulation are possible. This method is impossible to introduce into Streptococcus dysgalactiae subup. Equisimilis H46A is a physical and chemical alternative. This gene introduction system is the result of the application of SLO gene in the detection of hemolytic toxin. The SLO gene is located in the upper part of the body. The SLO gene is located in the middle of the body. As a result, SLO has the function of hemolytic toxin and the function of NADase secreted by bacteria in vitro. Toxins are highly toxic to cells, and it is difficult to construct large production systems for Escherichia coli and Bacillus subtilis. As a result,NADase was successfully produced in large quantities. Now, the biochemical properties and functions of NADase are being analyzed.