慢性関節リウマチに見いだされる新しい自己抗体の対応抗原分析および病因的意義の解明

类风湿性关节炎中发现的新自身抗体的相应抗原分析及其病因学意义的阐明

• 批准号: 13770239
• 负责人: 野島 崇樹
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770239/
• 关键词: 関節リウマチ; 自己抗体; ヒトDNA helicase V; FUSE結合蛋白; 自己抗原; 慢性関節リウマチ; サイトケラチン-18

ヒト末梢血リンパ球cDNAをテンプレートに用いて、癌遺伝子c-mycの調節因子であるfar up-stream element binding protein(FUSE結合蛋白=ヒトDNA helicase V)の全長cDNAをnested PCRを用いて分離に成功した。(シークエンスを行い、DNA配列を確認済)FUSE結合蛋白の抗原エピトープ解析を行うため、まずはKH-domain(DNA結合部位)の精製を目的として、86-457アミノ酸残基に相当する部分cDNAをnested PCRにより獲得し、発現ベクター(プラスミドpTriex)にサブクローニングして、大腸菌に発現させたHisTag付き蛋白(KH蛋白)を獲得した。TALON(コバルトレジンカラム)を用いてKH蛋白を精製し、免疫ブロットの抗原として用いた。関節リウマチ(RA)72例の患者血清を希釈し(抗大腸菌抗体吸収済)、患者血清中のIgGと、精製KH蛋白との抗原反応性を検討したところ、72例中5例(7%)、にKH蛋白との反応性が確認された。(FUSE結合蛋白の抗原エピトープ解析を進めるにあたり、N末、C末解析用の精製蛋白の発現を試みるも、いまだ成功せず、細かいエピトープ解析ができていない状況である。KH蛋白に関しては、大量精製を行い、ELISAを行うことでRA活動性との関連や、他の膠原病での抗体陽性率について検討を行っていく予定である。)

The full-length cDNA of c-myc was successfully isolated by nested PCR using a far up-stream element binding protein(FUSE binding protein = DNA helicase V) as a regulatory factor. FUSE-binding protein antigen analysis, purification of KH-domain(DNA binding site), partial cDNA corresponding to 86-457 amino acid residues were obtained by nested PCR, discovery of FUSE-binding protein (KH protein), detection of FUSE-binding protein (FUSE-binding site), purification of FUSE-binding protein (FUSE-binding site), detection of FUSE-binding protein ( TALON is used to purify KH protein and immunize it. Antigen reactivity of IgG and purified KH protein in 72 RA patients was investigated. Antigen reactivity of KH protein was confirmed in 5 RA patients (7%). (FUSE The analysis of binding protein antigen is carried out in the following ways: the analysis of purified protein with N terminal and C terminal is carried out successfully and the analysis of protein with N terminal and C terminal is carried out in detail. KH protein is related to the activity of RA and the antibody positive rate of other collagen diseases.

项目成果

古屋善章, 野島崇樹, 他: "肥厚性硬膜炎を合併したWegener肉芽腫症の1例"日本内科学会雑誌 創立100周年記念号. 第91巻第12号. 184-186 (2002)

Yoshiaki Furuya、Takaki Nojima 等：“韦格纳肉芽肿并发肥厚性脑膜炎一例”日本内科学会杂志，100 周年纪念卷，第 12 期。184-186（2002 年）。

Fujii T, Nojima T et al.: "Cytokine and immunogenetic profiles in Japanese patients with adult Still's disease. Association with chronic articular disease"Rheumatology(Oxford). 40(12). 1398-1404 (2001)

Fujii T、Nojima T 等人：“日本成人斯蒂尔病患者的细胞因子和免疫遗传学特征。与慢性关节疾病的关联”风湿病学（牛津）。