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ヒト破骨細胞形成系および骨吸収活性における関節リウマチ特異自己抗原の解析

人破骨细胞生成系统类风湿性关节炎特异性自身抗原及骨吸收活性分析

基本信息

批准号：
16790558
负责人：
野島崇樹
金额：
$ 2.24万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan (2005)Keio University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790558/
关键词：
関節リウマチ自己抗原破骨細胞

项目摘要

ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を用いた破骨細胞形成系の確立およびRA自己抗原の発現1)Ficoll-Paqueを用いて健常人協力者よりPBMCを回収し、マグネットビーズと抗ヒトCD14モノクローナル抗体を用いてCD14(+)細胞を分離し、10%FBS・M-CSF(25ng/ml)入りαMEMにて培養を行い、Trypsin-EDTA処理後dish付着細胞を回収し、更に10%FBS・M-CSF(25ng/ml)・ODF(20ng/ml)入りのαMEMにて多核巨細胞を回収した。2)1)にて回収した多核巨細胞についてTRAP (Tartrate-resistant Acid Phosphatase)染色陽性であることを確認。また、成熟破骨細胞の機能を有するか否かを確認するため、dentin slice上でのPit formationを確認した。3)上記、ヒトPBMCからの成熟破骨細胞形成系において、RA自己抗原であるカルパイン・カルパスタチン,c-myc・FBPの発現をRT-PCRで確認した。ウサギ破骨細胞骨吸収におけるカルパイン阻害蛋白・抗ヒトカルパスタチン抗体の影響1)7日齢ウサギ長管骨をαMEM/5%FBSで細切した上清を、Unfractionated Bone Cells(UBC)とした。dentin slice上でUBCが骨吸収活性(pit formation)を有する系で、カルパイン阻害物質であるヒトCPSドメインI・カルパインインヒビターペプタイドが、骨吸収活性を抑制する可能性があることを確認した。2)ウサギUBCの系で、抗ヒトカルパスタチン抗体がコントロールIgGと比し、骨吸収活性を亢進する可能性があることを確認した。3)ウサギUBCの系で抗カルパスタチン抗体陽性RA患者血清は骨吸収活性に影響しないことを確認した。

単 nuclear ヒト peripheral blood cells (PBMC) をいた osteoclast formation is の establish および RA antigen of their の発 now 1) Ficoll - Paque を with いて kin ordinary people together who より PBMC を back 収し, マグネットビーズと resistance ヒト CD14 モノクローナをル antibody with いて CD14 を separation し, 1 (+) cells 0%FBS · M-CSF(25ng/ml) was cultured in <s:1> αMEMにて for を, followed by にて and Trypsin-EDTA treatment. Then, dish carried the cells を and reproduced <s:1>. Finally, 10%FBS · M-CSF(25ng/ml) · ODF(20ng/ml) was cultured in <s:1> αMEMにて multinucleated giant cells を and reproduced た. 2)1)にて re-release of た multinucleated giant cells ににてててTRAP (Tartrate-resistant Acid Phosphatase) staining positive であるとをとを confirmation. Youdaoplaceholder0, the <s:1> function of mature osteoclasts を has する and no をを confirm するため, で <s:1> Pit formationを on dentin slice confirm たた. 3) written, ヒト PBMC からの mature osteoclast formation is において, RA antigen であるカルパイン · カルパスタチン, c - place, myc FBP の発 now を rt-pcr で confirm した. ウサギ osteoclast Bone absorption 収におけるカルパイン resistance against protein, anti ヒトカルパスタチのン antibody 1) 7 齢ウサギ long tube Bone を alpha MEM / 5% FBS で fine cut した supernatant を, Unfractionated ipads Cells (UBC) とした. Dentin slice on で UBC が bone absorption 収 activity (pit formation) を have するで, カルパイン resistance against material であるヒト CPS ドメイン I · カルパインインヒビターペプタイドが, bone absorption 収 inhibition すをる possibility があることを confirm した. 2) ウサギ UBC ので, anti ヒトカルパスタチン antibody がコントロール IgG と than し, bone absorption 収 active を hyperthyroidism する possibility があることを confirm した. 3) The activity of <s:1> bone resorption in the serum of RA patients with positive ウサギUBC strain で anti-カ <s:1> パスタチ <s:1> antibody に and the influence of に on the <s:1> bone resorption activity に confirmed by <s:1> ななとをとをとを is たた.