肝細胞及び胆管上皮内のC型肝炎ウイルスの検討

肝细胞和胆管上皮中丙型肝炎病毒的检查

• 批准号: 13770258
• 负责人: 鍛治 恭介
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770258/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法; 原発性胆汁性肝硬変; マイクロダイセクション

これまでC型肝炎患者の凍結肝組織から約10μmの厚さで切り出した標本を使用し、そこからLaser capture microdissection法を用いて肝細胞や胆管細胞を切り出し、RNAを抽出し、リアルタイム(Taq-man)PCR法を用いて、Total RNA量の測定やHCV RNA量の定量などを検討してきた。前年度は、C型肝炎肝組織において、炎症の程度や小葉内の領域が異なっていても、HCV RNA量は特に偏在しないことを明らかにした。しかしRNAの質に関しての評価に関しては十分ではなかった。そこで今回は、肝凍結組織から回収したRNAの正確な量および質の評価のために、Agilent bioanalyzer nano-kitおよびpico-kitでの検討を追加した。本検討ではごく微量のRNA溶液(1μl)からそのRNA濃度とRNAの質を表すrRNA ratio (28S/18S)を、nanoおよびpico単位で測定可能である。約1.5cm×1.5cmの大きさで、10μmの厚さで切り出した肝組織を用いた検討では、300〜700ng/μlのRNAが10μl回収され、またrRNA ratio (28S/18S)は1.5〜2.0であり、良好な状態でRNAが回収されていることが確認された。さらに、Laser capture microdissection法にて肝小葉の半分ほどの大きさを切り出したものについても同様の検討を行ったところ、300〜400Pg/μlのRNAが10μl回収されたことが確認された。今回の検討により、凍結肝組織からLaser capture microdissection法を用いて切り出した細胞から抽出したRNAは、良質でかつ十分量であることが確認されたことから、引き続きRNA amplificationおよびmicroarrayへの応用が可能であると考えられ、今後のさらなる研究の展開につながるものと考えている。

Frozen liver tissue from patients with hepatitis C was cut to a thickness of about 10μm, and the use of Laser capture microdissection was used to extract hepatocytes and bile duct cells, RNA was extracted, and Taq-man PCR was used to measure total RNA and quantify HCV RNA. In the past year, hepatitis C liver tissue, inflammation degree and lobular area vary, HCV RNA amount is especially different. The quality of RNA depends on the quality of RNA. This time, we will conduct additional discussions on the Agilent bioanalyzer nano-kit and pico-kit to evaluate the correct quantity and quality of RNA recovered from frozen liver tissues. In this study, we determined the RNA concentration and RNA quality of microRNA solution (1μl), rRNA ratio (28S/18S), nano and pico units. About 1.5 cm × 1.5 cm in size, 10μm in thickness, cut out of liver tissue, 300 ~ 700ng/μl of RNA, 10μl of RNA, rRNA ratio (28S/18S), 1.5 ~ 2.0, good RNA recovery, confirmed. In addition, Laser capture microdissection method was used to cut the size of the liver lobule, and the RNA of 300 ~ 400Pg/μl and 10μl were confirmed. In the present study, frozen liver tissue was extracted by Laser capture microdissection method, and RNA was extracted from cells. RNA amplification and microarray application were confirmed.