Machado-Joseph病患者脳におけるCAGリピートの体細胞モザイクの解析-レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法を用いて-

马查多-约瑟夫病患者大脑中 CAG 重复体的体细胞嵌合分析 - 使用激光捕获显微切割 -

基本信息

批准号：
12770322
负责人：
嶋崎晴雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770322/
关键词：
Machado-Joseph disease CAG repeat somatic mosaicism laser capture microdissection

项目摘要

Machado-Joseph病患者2例(体細胞のリピート数:患者A;70,患者B;81)の剖検脳より,小脳の凍結切片を作成した.Laser capture micro dissection法により小脳の細胞層(分子層,Purkinje細胞層,顆粒層,白質)毎に細胞群を分離し,DNAを抽出し,PCRを行い,リピート数を決定した.その結果,リピート数は,患者Aの分子層:68.97±0.36(n=33),Purkinje細胞層:68.50±0.49(n=36),顆粒層:69.50±0.23(n=36),白質:70.10±0.37(n=30)であった.分子層・Purkinje細胞層・顆粒層と白質の間で,各々リピート数に有意差を認めた.(Mann-Whitney test, P<0.05)患者Bの分子層:81.04±0.23(n=23),Purkinje細胞層:80.52±0.40(n=27),顆粒層:81.29±0.19(n=38),白質:81.80±0.12(n=25)であった.分子層・Purkinje細胞層・顆粒層と白質の間で,各々リピート数に有意差を認めた.(Mann-Whitney test, P<0.05)今回の実験より,分子層・Purkinje細胞層・顆粒層のリピート数が,白質のリピート数より有意に短いという結果が得られた.これらの結果は,小脳皮質のリピート数が,白質より短いという従来の報告と一致する.同じCAG repeat病であるDRPLAでは,顆粒層が小脳皮質の中では最も短いリピート数を示している.一方Machado-Joseph病では,今回の実験結果より,小脳皮質の層別にはリピート数は有意差がなかったが,顆粒層>分子層>Purkinje細胞層の順にrepeat数が短くなる傾向にあった.

小脑的冷冻切片是由两名Machado-Joseph病患者的尸检大脑（体细胞重复计数：患者A; 70，患者B; 81）制备的。通过解剖方法分离激光捕获的微细胞基团的每个细胞层（分子层，Purkinje细胞层，颗粒层，白质）在小脑中，提取DNA，进行PCR，并确定重复序列的数量。结果，重复次数为68.97±0.36（n = 33），Purkinje细胞层：68.50±0.49（n = 36），颗粒层：69.50±0.23（n = 36）和白色物质：70.10±0.37（n = 30）。分子层，浦肯野细胞层，颗粒层和白质之间的重复数量存在显着差异。（Mann-Whitney测试，p <0.05）患者B分子层：81.04±0.23（n = 23），Purkinje细胞层：80.52±0.40（n = 27），颗粒层：81.29±0.19（n = 38）（n = 38），白色问题：81.80±0.12（n = 25）。分子层，浦肯野细胞层，颗粒层和白质之间观察到显着差异。（Mann-Whitney测试，P <0.05）该实验表明，分子层，Purkinje细胞层和颗粒层中重复次数的数量明显短于白质重复次数。这些结果与以前的报道一致，即小脑皮层中重复次数比白质短。 Drpla中的同一CAG是一种重复疾病，颗粒层在小脑皮层中的重复数量最短。在Machado-Joseph氏病中，小脑皮层分层的重复次数并没有显着差异，但是重复的数量往往在颗粒层>分子层> Purkinje细胞层的顺序上缩短。