肝線維化における肝リンパ球由来のTGF-betaの役割

肝淋巴细胞来源的TGF-β在肝纤维化中的作用

• 批准号: 13770279
• 负责人: 伊達 昌孝
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Osaka Dental University (2002)Jikei University School of Medicine (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770279/
• 关键词: TGF-β; 肝リンパ球; 肝線維化; 肝再生; CCl_4; Concanavalin A; CCl4

(目的)TGF-βは肝障害時に伊東細胞などの非実質細胞において発現が誘導され、肝線維化や肝再生に重要な役割を果たすと考えられている。また、各種リンパ球、特にT細胞やNK細胞もTGF-βを大量に産生し、免疫抑制に関与することが明らかにされてきた。一方、障害肝においてはリンパ球の浸潤が強く見られるが、肝リンパ球からのTGF-βの産生については明らかにされていない。我々はマウス肝障害モデルと肝細胞および伊東細胞の初代培養細胞を用い、肝障害時の肝リンパ球におけるTGF-β発現と活性について検討を行った。(方法)C57BL/6マウスにCCl_4またはConcanavalin Aを投与し急性および慢性肝炎モデルを作成した。肝臓を摘出し、35% Percollを用いた比重遠心法にて肝リンパ球を分離、肝リンパ球数をカウントした。TGF-β mRNAの発現はNorthern Blot Hybridization法およびReal Time RT-PCR法にて検討した。また、分離した肝細胞と伊東細胞にp3TP-Luxベクター(TGF-βに感受性を持ったPromotorを組み込んだLuciferase reporter gene)を導入し、抗TGF-β中和抗体存在下および非存在下で、Transwellを用いて肝リンパ球とCo-culture後、Luciferase活性を測定した。(結果)正常肝リンパ球はTGF-βを発現し、その発現はCyclocheximideの添加により増強した。また、肝リンパ球とのCo-cultureにより、p3TP-Luxを導入した肝細胞および伊東細胞のLuciferase活性が誘導され、その活性は抗TGF-β中和抗体にて抑制され、Cyclocheximideの添加により増強した。急性および慢性肝障害モデルでは共に障害時に、肝組織全体においてTGF-βの発現誘導が認められた。また、分離肝リンパ球では肝障害の有無によりTGF-βの発現の変化は認められなかったが、肝リンパ球の総数は急性、慢性ともに障害肝では増加していた。(結語)肝リンパ球はTGF-βを発現しており、肝細胞および伊東細胞に対して生物学的活性を有していた。また、肝障害の有無により肝リンパ球におけるTGF-β発現に差を認めなかったが、肝リンパ球の増加により肝リンパ球由来のTGF-β発現の絶対量は正常肝に比べ増加していると考えられる。以上の結果は、肝リンパ球由来の活性TGF-βが肝障害時に肝線維化、肝再生に影響を及ぼす可能性を示唆する所見と考えられる。

(Objective)TGF-β plays an important role in the induction, maintenance and regeneration of liver cells and non-cytoplasmic cells during liver injury. TGF-beta is produced in large quantities by various cells, especially T cells and NK cells, and is related to immunosuppression. One side, the barrier liver, the barrier liver. The expression and activity of TGF-β in primary cultured cells of hepatocytes and Ito cells were investigated during liver injury. C57BL/6 is A highly effective method for treating acute and chronic hepatitis. 35% Percoll is used to separate the particles from each other. Expression of TGF-β mRNA was detected by Northern Blot Hybridization and Real Time RT-PCR. Luciferase reporter gene was introduced into isolated hepatocytes and Ito cells. Luciferase activity was measured in the presence or absence of anti-TGF-β neutralizing antibodies. (Results) TGF-β was found in normal liver tissues, and the presence of TGF-β was increased in addition to Cycloheximide. Luciferase activity was induced in hepatocytes and Ito cells by introduction of p3TP-Lux into Co-culture medium, inhibited by anti-TGF-β neutralizing antibody, and enhanced by addition of Cycloheximide. Acute and chronic liver disease may be induced by TGF-β in the whole liver tissue. The expression of TGF-β was detected in the liver, and the total number of liver cells was increased in acute and chronic cases. (Conclusion) TGF-β expression in liver cells, liver cells and Ito cells are involved in biological activities. The expression of TGF-β in liver tissue was higher than that in normal liver tissue. These findings suggest that TGF-β activity in liver tissue may contribute to the development of liver disease.