アデノウイルスベクターを用いたラット黒質におけるα-Synucleinの強制発現

使用腺病毒载体在大鼠黑质中强制表达 α-突触核蛋白

• 批准号: 13770322
• 负责人: 野村 拓夫
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770322/
• 关键词: パーキンソン病; α-synuclein; 6-OHDA; アデノウイルスベクター; ラット

α-synucleinの機能を知る上で、wild typeおよび家族性パーキンソン病に関連した変異タンパクをコードする2つのDNA(A30T, A53T)点変異遺伝子をFeanyらより入手した。これらの遺伝子がコードするタンパクを強制発言させるためにアデノウイルスベクターを用いることとした。まずα-synuclein遺伝子をコスミドベクターに挿入。293(Human Embryonic Kidney)cellにアデノウイルスゲノムDNAと共にco-transfectionし、目的遺伝子が組み込まれた組み替えアデノウイルスを増殖させた。この濃縮ウイルスを定位脳手術によりオスウイスターラットの片側黒質に注入した。注入後3日、7日の急性期と30日の慢性期モデルにおいてα-Synuclein、Tyrosine Hydroxylase(TH)、GFAPの各種抗体を用いて免疫組織化学的検討を行った。また慢性期モデルについてはApomorphine皮下注射後の運動量や回転運動について行動観察を行った。まず急性期、慢性期を通じて黒質のTH陽性細胞の著明な減少、線条体におけるTH陽性神経終末の減少共に認められなかった。GFAP染色においてアストロサイトの活性についても検討したが注入部に局所的なグリアの活性を認めるのみであり6-OHDAモデルに認められるような黒質ドパミンニューロンの神経終末が存在する線条体におけるグリアの活性化は認められなかった。またヒトα-Synuclein抗体を用いた免疫組織化学的検討では注入3日目に固定した1例においてα-Synuclein抗体陽性の凝集塊が認められたがこれはおそらく黒質のドパミンニューロンが感染により壊死に陥った結果ではないかと推測された。しかしこれも多くのサンプルで認められる共通した変化とは言えなかった。慢性期のモデルにおける行動観察においてはα-Synuclein遺伝子A53Tの点変異モデルについて注入側(左側)に一致する左側への回転運動が増加しているモデルも見られたがこれについても全例がこのような傾向を呈しているわけではなかった。またA30Pの点変異モデルやα-SynucleinのWildTypeについても同様な実験を行ったが、このような変化は認められなかった。現段階では報告可能なパーキンソン病モデルの作成には至っていないと考えられた。

The function of α-synuclein is well known, and the wild type and family type of α-synuclein are closely related to the DNA(A30T, A53T). This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. The α-synuclein gene is introduced into the female body. 293(Human Embryonic Kidney)cell loss, loss This is the first time that I've seen a film. Immunohistochemical studies were performed on the acute phase and chronic phase 3 and 7 days after injection with antibodies to α-Synuclein, Tyrosine Hydroxylase(TH) and GFAP. Chronic period: exercise volume after subcutaneous injection of Apomorphine, exercise recovery, action monitoring During acute phase and chronic phase, TH-positive cells and TH-positive terminals in the cytoplasm decreased. GFAP staining is a process for determining the activity of the enzyme in the injection site. 6-OHDA staining is a process for determining the activity of the enzyme in the injection site. Immunohistochemical study of α-Synuclein antibody was performed on day 3 of injection, fixation in one case, and α-Synuclein antibody positive agglutination in one case. I'm sorry, but I'm sorry. In the chronic phase, the movement of the α-Synuclein gene A53T is observed in the middle of the injection side (left side), and the movement of the left side is increased in the middle of the injection side. A30P's point difference is α-Synuclein's WildType. At the present stage, it is reported that the preparation of the report is possible.