INFγ発現とT細胞レセプターを指標としたマイナー組織適合抗原特異的T細胞の検出

以INFγ表达和T细胞受体为指标检测次要组织相容性抗原特异性T细胞

• 批准号: 13770578
• 负责人: 高見 昭良
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770578/
• 关键词: リンパ性急性転化; マイナー組織適合抗原; 細胞傷害性T細胞; インターフェロンγ; T細胞レセプター; H-Yペプチド; 慢性骨髄性白血病; 細胞障害性T細胞; T細胞レセプト

Y染色体特異的マイナー組織適合抗原であるH-Yペプチドは男性にのみ発現し,HLA-A2に表出される.まず,HLA一致姉からの同種骨髄移植後に慢性骨髄性白血病リンパ性急性転化を来した男性患者(HLA-A2陽性)を対象に,患者の白血病細胞に対し高い細胞傷害活性を示すドナー由来のT細胞を作成した.H-Yペプチドでパルスしたドナー由来樹状細胞を抗原提示細胞に用いてドナーのT細胞を繰り返し刺激することにより,細胞傷害性T細胞を樹立した.この細胞傷害性T細胞は,ドナーの樹状細胞に対しパルスするペプチド濃度依存性の細胞傷害活性を示した.さらに,患者白血病細胞・線維芽細胞,男性リンパ芽球性リンパ細胞株細胞に対し,HLA-A2拘束性の細胞傷害活性を示した.次に,同じ男性患者が再移植を受けたのち分子遺伝学的寛解を維持していた時期の流血中に,インターフェロン(IFN)γ発現とT細胞レセプターを指標としてH-Yペプチド特異的T細胞を検出した.患者血液からCD8陽性細胞を分離し,H-Yペプチドで5時間刺激したところ,6.8%がIFN-γ陽性となった.このCD8陽性IFN-γ陽性細胞のT細胞レセプターβ鎖のCDR3領域をPCRにより増幅し,サイズ・スペクトラタイピングを行った.その結果,BV22においてin vitroで誘導された細胞傷害性T細胞と同じサイズのピークが検出された.塩基配列を決定したところ,患者の流血中に存在しているH-Yペプチド反応性T細胞とin vitroで樹立した細胞傷害性T細胞で共通のCDR3領域の配列が証明された.流血中に存在していたCD8陽性細胞は,H-Yペプチド特異的にIFN-γを発現することから,同種免疫による抗腫瘍効果の担当細胞であった可能性がある.

H-Y肽是Y染色体特异性的小组织相容性抗原，仅在男性中表达，并在HLA-A2中表达。首先，在男性患者（HLA-A2阳性）中产生了对患者白血病细胞表现出高细胞毒性活性的供体的T细胞，这些患者在与HLA匹配的姐姐受到了慢性骨髓骨髓的移植后经历了慢性髓样白血病淋巴急性转化。通过使用供体衍生的树突状细胞脉动用H-Y肽作为抗原呈递细胞来反复刺激供体T细胞来建立细胞毒性T细胞。这些细胞毒性T细胞表现出肽浓度依赖性的细胞毒性活性，该活性对供体的树突状细胞脉动。此外，患者白血病稀释剂HLA-A2限制的细胞毒性活性在血管，成纤维细胞和雄性淋巴细胞淋巴细胞细胞系中显示出来。接下来，在对同一男性患者进行重新移植并维持分子遗传缓解期间的血液流动期间，使用干扰素（IFN）γ表达和T细胞受体作为指示器检测H-Y肽特异性T细胞。当从患者的血液中分离CD8阳性细胞并用H-Y肽刺激5小时时，6.8％的细胞为IFN-γ阳性。通过PCR扩增该CD8阳性IFN-γ阳性细胞的T细胞受体β链的CDR3区域，并进行了尺寸频谱。结果，通过PCR扩增CD8阳性IFN-γ阳性细胞的T细胞受体β链的CDR3区域，并进行了尺寸光谱。结果，诱导是在BV22中进行的。检测到与在体外诱导的细胞毒性T细胞相同的峰。确定核苷酸序列证明了与患者血流中存在的H-Y肽反应性T细胞共有的CDR3区域的序列，并在体外建立了细胞毒性T细胞。血流中存在的CD8阳性细胞在H-Y肽中特别表达IFN-γ，因此可能是导致同种免疫性抗肿瘤作用的细胞。

项目成果

Takami A, et al.: "Menatetrenone, a vitamin K2 analog, ameliorates cytopenia in patients with refractory anemia of myelodysplastic syndrome"Ann Hematol. 81・1. 16-19 (2002)

Takami A 等人：“Menatetrenone，一种维生素 K2 类似物，可改善骨髓增生异常综合征难治性贫血患者的血细胞减少症”Ann Hematol 81·1 (2002)。

Takami A, et al.: "Relapse of chronic myeloid leukemia(CML) in lymphoid crisis after allogeneic bone marrow transplantation for CML in chronic phase with busulfan plus cyclophosphamide regimen"Haematologica. (発表予定).

Takami A 等人：“采用白消安加环磷酰胺方案对慢性期 CML 进行同种异体骨髓移植后，淋巴危象中的慢性粒细胞白血病 (CML) 复发”（即将发表）。

Takami A, et al.: "Menatetrenone, avitamin K2 analog, ameliorates cytopenia in patients with refractory anemia of myelodysplastic syndrome"Ann Hematol. 81. 16-19 (2001)

Takami A 等人：“Menatetrenone，维生素 K2 类似物，可改善骨髓增生异常综合征难治性贫血患者的血细胞减少症”Ann Hematol。

高見昭良, 中尾眞二: "ミニ移植"医薬ジャーナル. 37. 1040-1046 (2001)

Akira Takami、Shinji Nakao：“微型移植”制药杂志 37. 1040-1046 (2001)。

高見昭良, 中尾眞二: "先端医療シリーズ13・腎臓病の最新医療"先端医療技術研究所. 5 (2001)

Akira Takami、Shinji Nakao：“先进医学系列 13：肾脏疾病的最新医学治疗” 先进医疗技术研究所 5 (2001)。