新規cAMPセンサーによるインスリン分泌の調節機構

新型cAMP传感器对胰岛素分泌的调节机制

• 批准号: 13770642
• 负责人: 三木 隆司
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770642/
• 关键词: cAMP-GEF2; 膵β細胞; ジーンターゲティング; Cre; loxPシステム; cAMP

CAMPS (cAMP-GEFII)は膵β細胞をはじめ中枢神経系、神経内分泌系などに広く発現しており、膵β細胞ではcAMP濃度を感知するセンサーとしてインスリン開口放出の制御に関与すると考えられる。申請者はCAMPSの膵β細胞での機能を直接的に明らかにする目的でCre/loxPシステムを用いてコンディショナルCAMPS遺伝子破壊マウスを作製することを試みた。申請者は、特定組織以外で完全に遺伝子欠損し、特定組織で発現がレスキューされる「conditional rescue法」を考案し、逆向きのloxPでExon 1を挟むようにしてloxPノックインマウスを作製し、CreによるExon 1の反転で遺伝子破壊とレスキューを行うこととした。loxPノックインマウス(CAMPS^<loxP/+>)は正常に出生したが、CAMPS^<loxP/+>を全身性にCreを発現するマウス(Cre-Tg)と交配してExon 1が反転したマウスを作製しようとしたところ、Creを発現しloxPアリルを有するマウス(Cre-Tg+,CAMPS^<loxP/+>マウス)は全く得られなかった。そこでノックインマウスのコンストラクトを詳細に検討したところ、遺伝子の反転により正常CAMPSのmRNAと約1kbに渡り相補な構造を有するmRNAが形成されCAMPS遺伝子の発現が抑制されることが明らかになった。そこでCre-TgとCAMPS^<loxP/+>マウスを交配し、全身性にCAMPSを破壊したマウス胎児を用いて表現型の解析をしたところ、胎生13.5日以降ではCre-Tg+,CAMPS^<loxP/+>は全く存在せず、少なくとも胎生13.5日以前に致死的な変化が生じていることが推測された。この結果からCAMPSが胎児期の個体発生において極めて重要な役割を果たしていることが明らかになった。

CAMPS (cAMP - GEFII) は Cui beta cells を は じ め central 経 is god, god 経 endocrine system な ど に hiroo く 発 now し て お り, Cui beta cells で は concentration cAMP を perception す る セ ン サ ー と し て イ ン ス リ ン opening release の suppression に masato and す る と exam え ら れ る. Applicants は CAMPS の Cui beta cells で の function を directly に Ming ら か に す る purpose で Cre/loxP シ ス テ ム を with い て コ ン デ ィ シ ョ ナ ル CAMPS heritage 伝 son broken 壊 マ ウ ス を cropping す る こ と を try み た. Applicants outside で は, specific organizations completely に heritage 伝 し son owe damage, specific organization で 発 now が レ ス キ ュ ー さ れ る "conditional rescue method" を し test case, reverse き の loxP で Exon 1 を carry む よ う に し て loxP ノ ッ ク イ ン マ ウ ス を as し, Cre に よ る Exon 1. <s:1> reverse 転で legacy 伝 sub-break 壊とレスキュ を を line う とと とと た た. LoxP ノ ッ ク イ ン マ ウ ス (CAMPS ^ < loxP / + >) は born normal に し た が, CAMPS ^ < loxP / + > を systemic に Cre を 発 now す る マ ウ ス Tg (Cre) と mating し て Exon 1 が inverse planning し た マ ウ ス を cropping し よ う と し た と こ ろ, Cre を 発 now し loxP ア リ ル を have す る マ ウ ス (Cre - Tg +, CAMPS ^ < loxP / + > マ ウ ス) は may bring ら く れ な か っ た. そ こ で ノ ッ ク イ ン マ ウ ス の コ ン ス ト ラ ク ト を detailed に beg し 検 た と こ ろ, but 伝 の inverse planning に よ り normal CAMPS の mRNA と about 1 KB に crossing り phase fill な a す を construction る mRNA が form さ れ CAMPS heritage 伝 son の 発 now が inhibit さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. そ こ で Cre - Tg と CAMPS ^ < loxP / + > マ ウ ス を し mating, systemic に CAMPS を broken 壊 し た マ ウ ス tire where を with い て phenotype の parsing を し た と こ ろ, viviparous 13.5 days for で は Cre - Tg +, CAMPS ^ < loxP / + > は く all exist せ ず, less な く と も viviparous 13.5 The な transformed が life that died に a few days ago じて る とが とが speculation された. こ の results か ら CAMPS が tire where の individuals born 発 に お い て め extremely important な て "を cut fruit た し て い る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Zhang, Y.: "Identification, Tissue Expression, and Functional Characterization of Otx3, a Novel Member of the Otx Family"J. Biol. Chem.. 277・31. 28065-28069 (2002)

张，Y.：“Otx家族新成员Otx3的鉴定、组织表达和功能表征” J. Biol. 277・31 (2002)

三木 隆司: "新たなcAMPセンサーによるインスリン分泌調節機構"最新医学. 56・3. 488-492 (2001)

Takashi Miki：“新型cAMP传感器的胰岛素分泌调节机制”现代医学56・3。

Zingman, L.V.: "Kir6.2 is required for adaptation to stress., 13278-13283"Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 99・20. 13278-13283 (2002)

Zingman，L.V.：“Kir6.2 是适应压力所必需的。”Proc. Acad. USA.. 13278-13283 (2002)。

三木 隆司, 南 幸太郎, 清野 進: "脳におけるグルコース感知とK_<ATP>チャネル。 p.177-182. 分子糖尿病学の進歩-基礎から臨床まで-2002-"金原出版. 200 (2002)

Takashi Miki、Kotaro Minami、Susumu Seino：“大脑中的葡萄糖传感和 K_<ATP> 通道。第 177-182 页。分子糖尿病的进展 - 从基础知识到临床实践 - 2002 年 -”Kanehara Publishing 200（2002 年）。

Suzuki, M.: "Cardioprotective effect of diazoxide is mediated by activation of sarcolemmal but not mitochondrial ATP-sensitive potassium channels in mice"Circulation. 107・5. 682-685

Suzuki, M.：“二氮嗪的心脏保护作用是通过激活小鼠肌膜而不是线粒体 ATP 敏感钾通道介导的”循环 107・5。