分子間相互作用解析装置を使ったマトリックスメタロプロテアーゼ活性の測定

使用分子相互作用分析仪测量基质金属蛋白酶活性

• 批准号: 13770705
• 负责人: 小笠原 聡
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770705/
• 关键词: TRE; テロメア; 相互作用; がん; 分子標的治療; 食道癌; 侵潤・転移; 癌関連遺伝子; MMP

生体内分子間相互作用解析装置(Biacore 3000,BIACORE, Uppsala, Sweden)を用いてmatrix metalloproteinase (MMP)の細胞外基質分解活性をreal-timeに計測し,定量かする方法matrix degradation assayを開発した.本法は,以下の特徴を持っていた.(1)Real-timeの観察が可能であり,分解初速度を計測可能であり,単位重量あたりの組織内に含まれるMMPによる細胞分解活性の評価が5分と言う短時間で可能であった.(2)基質の固定化はゼラチンが最も良子であった.Type 1 collagen, lamineは分解速度が遅く,微量の生体材料の場合には30分程の判定時間が必要であった.(3)がん細胞のmatri gel invasion assayによって評価した,浸潤能とMMP活性は相関していた.(4)生体材料を用いた検討でも解析が可能であり,浸潤・転移予測に有効であった.(5)甲状腺癌での検討では,未分化癌で最も浸潤・転移能が高くこれらの細胞ではmaspin (mammary serpin)の過剰発現がみられた.(6)maspinの発現とdegradation assayの結果は相関していた.matrix degradation assayはがんの浸潤・転移能の判定ばかりでなく,新規MMP inhibitorのスクリーニングにも有用な方法であり,分子標的治療法の開発に大いに貢献すると思われた.

In vivo molecular interaction analyzer (Biacore 3000,BIACORE, Uppsala, Sweden) was developed for real-time measurement and quantification of extracellular matrix degradation activity of matrix metalloproteinase (MMP). This law is characterized by the following: (1)Real-time observation is possible, initial decomposition rate measurement is possible, unit weight is possible, MMP content in tissues is possible, and cell decomposition activity is possible in a short time. (2)Immobilization of substrate is the most important factor.Type 1 collagen, lamine is the decomposition speed is very fast, and the determination time of 30 minutes is necessary in the case of trace biological materials. (3)The matri gel invasion assay of cells was evaluated, and MMP activity was correlated with infiltration activity. (4)The biological material is used to analyze the possibility of infiltration and migration. (5)Thyroid cancer is the most invasive and metastatic cancer, and maspin (mammary serpin) is the most common. (6) The results of maspin detection and degradation assay are correlated with each other.Matrix degradation assay is a useful method for determining the infiltration and migration energy of MMP inhibitor.

项目成果

Maesawa C, Inaba T, Sato H, Iijima S, Ishida K, Terashima M, Sato R, et al.: "A rapid biosensor chip assay for measuring of telomerase activity using surface plasmon resonance"Nucleic Acids Res. 31. E4-E4 (2003)

Maesawa C、Inaba T、Sato H、Iijima S、Ishida K、Terashima M、Sato R 等人：“使用表面等离子体共振测量端粒酶活性的快速生物传感器芯片测定”核酸研究。

Ikeda K, Ogasawara S, et al.: "Chemoradiotherapy followed by surgery for thoracic esophageal cancer potentially or actually involving adjacent organs"Dis Esophagus. 14・3-4. 197-201 (2001)

Ikeda K, Ogasawara S, et al.：“胸部食管癌潜在或实际邻近器官的放化疗后手术”Dis Esophagus 14・3-201 (2001)。