ARDS病態形成におけるロイコトリエンB4の役割の解明

阐明白三烯 B4 在 ARDS 发病机制中的作用

• 批准号: 13770823
• 负责人: 伊藤 伸子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770823/
• 关键词: ロイコトリエンB4受容体; 脱顆粒機構; RBL細胞

成人呼吸促迫症候群に代表される致死的な「白血球過剰反応」の発症機構解明のため、活性化白血球による脱顆粒のモデルとして広く用いられているRBL (Rat basophilic leukemia cell;ラット好塩基性白血病細胞)にロイコトリエンB4(LTB4)受容体(BLT1)遺伝子を導入し、安定発現株(RBL-BLT1)を得た。RBL-BLT1でLTB4刺激による細胞内カルシウム上昇と、リソソーム酵素βヘキソサミニダーゼの脱顆粒反応が認められ、用量依存的であった。さらにLTB4刺激がいかなる細胞内シグナル分子を介して脱顆粒反応を起こすか、種々の阻害剤を用いて解析した。LTB4刺激による脱顆粒反応は、百日咳毒素処理、プロテインキナーゼC阻害剤、ホスホイノシトール3キナーゼ(PI3-K)阻害剤ワートマニンにより抑制され、LTB4刺激による脱顆粒反応はGi様タンパク質を介し、プロテインキナーゼC、PI3-Kの活性化を必要とすることが示唆された。カルシウムキレート剤EGTA添加により細胞内カルシウム上昇反応と脱顆粒反応が完全に抑制されたことから、細胞内カルシウム上昇が脱顆粒反応に必要であることがわかった。また、LTB4によるPI3-Kの活性化は細胞内カルシウム上昇反応の影響されず、細胞内カルシウム上昇反応もワートマニンに影響されなかった。さらにホスホイノシトール3キナーゼガンマタイプのノックアウトマウスより採取した顆粒球では、LTB4刺激による細胞内カルシウム上昇反応は野生型マウスと比べ変わりなかったが、脱顆粒反応は顕著に減少していた。以上より、LTB4刺激による脱顆粒反応はGi様タンパク質を介し、細胞内カルシウム上昇とPI3-K活性化の両者が必須であることがわかった。今後、ARDSモデルラットや、BLT1ノックアウトマウスを用いて病態発症におけるLTB4の役割を追求する予定である。

Adult respiratory syndrome represents the development mechanism of fatal leukocyte degeneration, and activated leukocytes are degranulated. RBL (Rat basophilic leukemia cell; primary leukemia cell) is introduced into the receptor B4(LTB4) and stable development strain RBL-BLT1 is obtained. RBL-BLT1 and LTB4 stimulate intracellular cell cycle up-regulation and release of enzyme beta. In addition, LTB4 stimulation can be used to mediate the formation of intracellular molecules, and to analyze the effects of anti-inflammatory and anti-inflammatory agents. LTB4 stimulation degranulation, pertussis toxin treatment, anti-C inhibitor, anti-C inhibitor, anti- EGTA addition is necessary for complete inhibition of intracellular cell growth and degranulation. The activation of PI3-K by LTB4 has an effect on the intracellular up-regulation. In addition, it is necessary to increase the number of cells stimulated by LTB 4 and decrease the number of cells stimulated by LTB4. The above mentioned factors, such as LTB4 stimulation, degranulation, anti-Gi-1, anti-Gi-2, anti-Gi-3, anti-Gi-4, anti-Gi-3, anti-Gi-4, anti-Gi In the future, ARDS, BLT1 and BLT 4 will be used to detect pathological changes.

项目成果

伊藤 伸子(Nobuko Ito): "Requirement of Phosphatidylinositol 3-kinase Activation and Calcium influx for Leukotriene B_4-induced Enzyme Release"The Journal of Biological Chemistry. 277・47. 44898-44904 (2002)

伊藤伸子：“白三烯 B_4 诱导的酶释放的磷脂酰肌醇 3-激酶激活和钙流入的要求”《生物化学杂志》277・47（2002 年）。