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ラットモデルにおけるマスト細胞の新しい脱顆粒機構の解析とヒトマスト細胞への応用

大鼠模型肥大细胞脱颗粒新机制分析及其在人类肥大细胞中的应用

基本信息

批准号：
12770117
负责人：
松井卓哉
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770117/
关键词：
マスト細胞 LPS マクロファージ MASA エンドトキシン

项目摘要

LPS活性化マクロファージのhistamine releasing factor(HRF)がラット腹腔内マスト細胞の緩徐な脱顆粒を誘導することを昨年明らかし、引き続きHRFの同定検索を行った。活性化マクロファージが窒素酸化物を放出することは周知のことであり、PFA310NO(東京化成工業社製)を用いて培養上清内の窒素酸化物(NO)を定量した。活性化マクロファージ群とcontrol群の間に統計学的な有意差は無く、量的及び半減期からNOはマスト細胞の緩徐な脱顆粒に直接関与しないと考えられた。次に活性化マクロファージ培養上清をaffi-gel blue gel(Bio Rad社)でアルブミンを除去し、ハイドロキシアパタイトカラムとゲルろ過カラムを組み合わせてHPLCで部分精製した。HRFは分子量100kDaのピークに強い活性を示した。以上の結果よりHRFはNOではなく熱安定な高分子プロテアーゼ物質と考えられた。次に対照としたI型アレルギー反応においてマスト細胞特異的抗体(抗MASA抗体)を用いてMASA発現を検討した。IgE抗体の結合したラット腹腔マスト細胞を抗原(DNP-As)で刺激するとMASAが発現した。そこでヒトマスト細胞株(HMC-1)を用いてサイトカインによるMASA発現を検討した。IL-6(50ng/ml)、SCF(50ng/ml)、IL-4(10ng/ml)、TGF-β(10ng/ml)、TNF-α(20ng/ml)でHMC1を刺激し5日間培養した。TGF-βで刺激したHMC-1がmRNA及びタンパクレベルでMASAを発現し、活性化マクロファージ由来のTGF-βがマスト細胞の活性化を誘導することを示唆した。よって本実験は活性化マクロファージとマスト細胞のcell-cell interactionが急性と慢性炎症の両者に関与することを示した。

The histamine releasing factor(HRF) of LPS activation was induced in the peritoneal cells by the same pathway as HRF. The activity of PFA310NO(manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was quantified in the culture supernatant. The activity of the cells is directly related to the quantity and half-life of the cells. The supernatant of the secondary culture was an affi-gel blue gel(Bio Rad), which was partially purified by HPLC. HRF has a molecular weight of 100kDa and is highly active. The above results show that HRF is a stable polymer. In addition, the detection of MASA by cell-specific antibodies (anti-MASA antibodies) was also discussed. IgE antibody binding to the peritoneal cell antigen (DNP-As) is stimulated by MASA. The cell line HMC-1 was used to investigate MASA development. IL-6(50ng/ml), SCF(50ng/ml), IL-4(10ng/ml), TGF-β(10ng/ml), TNF-α(20ng/ml) were used to stimulate HMC1 during 5 days. TGF-β stimulation of HMC-1 mRNA and MASA expression and activation of TGF-β cells induced by activation The cell-cell interaction between the two groups is related to acute and chronic inflammation.