ラット陰茎海綿体内nNOS遺伝子導入の動脈硬化・加齢に伴う勃起不全に対する効果

将 nNOS 基因导入大鼠阴茎对动脉硬化和年龄相关性勃起功能障碍的影响

• 批准号: 13770884
• 负责人: 和田 孝浩
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770884/
• 关键词: ラット陰茎海綿体; Electroporation; 遺伝子導入; NO; テストステロン

ラット陰茎海綿体におけるElectroporatorを用いたnNOSの遺伝子導入法の確立とその発現機能の解析 我々は8週齢の雄性SDラットをベントバルビタール麻酔後、ペニス周囲の皮膚組織を剥離し、ペニスを露出し、ラット陰茎海綿体に各種レポーター遺伝子(ルシフェラーゼ遺伝子、GFP遺伝子)を組み込んだプラスミドを注入し、Electroporatorに接続した電極で電気刺激を加え遺伝子導入を行った。2日後、ラットを断頭屠殺し、ペニスを摘出し、HE染色、ルシフェラーゼ定量解析、GFP蛍光観察を行った。HE染色での電気刺激による組織壊死はほとんど認めなかった。ルシフェラーゼ定量解析ではルミノカウンターで測定するとコントロール群で12.7±1.1、遺伝子導入群で548.5±2.0であり、コントロール群と比較して約50倍の発現を認めた。この際のElectroporationの条件のparameterは45volt,1A,50mSec,1Hz,8timesであった。次にこれを用いてIn vitroの機能実験を行った。30μ M phenylephrineでの前収縮下での経壁電気刺激による弛緩反応およびCarbacholによる弛緩反応をみたが有意差はみられなかった。これはnNOSの遺伝子が特異的に神経や血管内皮に導入されていないことや組織学的に明らかでない平滑筋の障害があったのではないかと考えられた。Electroporation法はきわめて簡便であり、本法を用いた陰茎への遺伝子導入の可能性は示唆されたものの何らかの工夫がさらに必要と考えられた。今後はヘルペスウイルスのような神経に特異的に導入できるベクターを用いた遺伝子導入法の確立も視野に入れながらこういった治療法を考えるべきと思われた。

An analysis of the function of nNOS gene introduction method in the use of Electroporator in the corpus cavernosum of penis. The male SD cells of 8 weeks old were separated from the skin tissue of 8 weeks old, and the skin tissue of 8 weeks old was peeled off to expose the nNOS gene.(GFP gene, GFP gene) is a group of molecules that are injected into the electroporator, and the Electroporator is connected to the electrode to stimulate the electroporation. 2 days later, cut off the head, extract, HE staining, quantitative analysis, GFP fluorescence detection HE staining was performed on the tissue after electrical stimulation. The quantitative analysis results showed that the detection rate was 12.7±1.1 for the group of gene introducers and 548.5±2.0 for the group of gene introducers. The detection rate was about 50 times higher than that of the group of gene introducers. The parameters of the Electroporation conditions are 45volt,1A,50mSec,1Hz,8times. In vitro, the function is performed. 30μ M phenylephrine was used to stimulate the nervous system wall. This is the first time that a patient has been diagnosed as a disease. Electroporation method is simple and easy to use. The possibility of introducing penis DNA is necessary. In the future, the introduction of special methods for mental health will be discussed in detail.