ループス腎炎発症・進展におけるInterleukin-4(IL-4)の役割

白介素 4 (IL-4) 在狼疮性肾炎发病和进展中的作用

• 批准号: 14770564
• 负责人: 上田 誠二
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770564/
• 关键词: Inferleukin-4; lupus nephritis; SLE; Interleukin-4

1.野生型Interleukin-4 (IL-4)、変異型IL-4(ヒトで公表された変異体を参考にしたマウスでの相同体Dominant negative IL-4 (Q116D/Y116D)、ならびに細胞特異的IL-4 (Shanafelt等 (PNAS,95;9454-9458,1998)により開発された、T cellやマクロファージのレセプターには作用するが,その他の細胞には作用しない変異型IL-4:Q116E)をpcDNA3(mammalian expression vector)にsub-cloningし、作成した発現ベクターをCOS細胞にtrasfectし、培養上清中のIL-4の抗原性をELISA法で確認した。control vectorに比し、それぞれ約30倍程度の増加が観察できた。2.マウスの血管内皮細胞、腹腔マクロファージ、抹梢血リンパ球を分離培養し、上記の発現ベクターをtransfectし、in vitroでの生物学的効果を下記の方法で有意に変化させることを確認した。内皮細胞:MCP-1、IL-6の発現(ELISA法)、VCAM-1の発現(flowcytometry).マクロファージ:LPS刺激下のINF産生(ELISA法).T cell:増殖能(BrdU uptake).B cell:分化(CD19、CD23発現).3.マウスに対し各ベクター100-200μgを尾静脈より投与する方法で遺伝子導入を行い、血中のIL-4濃度の上昇をELISA法で確認、遺伝子導入効率、および発現効果に、非常にバラツキがあり、高い導入効率、発現効果を得るため、それぞれを発現するadenovirus vectorを作成した。尾静脈より各々をcodeするadenovirus vector 1x10^9 pfu静注することで安定した遺伝子導入を行うことができた。現在、脾臓より分離したリンパ球のsub setをflowcytometryで解析である。今後はSLEモデルマウスに対しIL-4遺伝子(野生型、変異型)導入を行い、病態への影響の検討を行っていく。

1. wild-type Interleukin-4 (IL-4), variant IL-4 (Q116D/Y116D), and cell-specific IL-4 (Shanafelt et al.(PNAS,95;9454- 9458, 1998), developed and developed T cell cultures that act on other cells, including heterotypic IL-4: Q116E), sub-cloning and preparation of pcDNA3 (mammalian expression vector), and identification of IL-4 antigenicity in COS cells and culture supernatants by ELISA. The control vector ratio is about 30 times higher than that of the control vector. 2. Isolation and culture of vascular endothelial cells, peritoneal cells, and lymphocytes, as described above, and identification of biological effects in vitro, as described below Endothelial cells:MCP-1, IL-6 expression (ELISA), VCAM-1 expression (flowcytometry). T cell: Proliferation ability (BrdU uptake). B cell: Differentiation (CD19, CD23 uptake). 3. The method of injection into tail vein for 100-200μg of each sample was used to confirm the process of gene introduction, the increase of IL-4 concentration in blood, ELISA method, gene introduction efficiency, detection effect, very high gene introduction efficiency, detection effect, detection effect. Adenovirus vector 1x10^9 pfu intravenous injection Now, the separation of the two spheres is a sub-set of flowcytometry analysis. In the future, SLE will continue to investigate the effects of IL-4 gene introduction (wild-type, variant) and pathological changes.