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臨床応用を目指した増殖因子受容体を分子標的としたターゲット療法の開発

开发针对生长因子受体的靶向治疗用于临床应用

基本信息

批准号：
14770620
负责人：
八木洋
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770620/
关键词：
モノクローナル抗体 IL-2 ターゲット療法 IL-2Receptor RNase conjugate monoclonal antibody Fv

项目摘要

1.研究方法まず抗IL-2受容体抗体FvフラグメントのcDNAとdes1-7RNaseのcDNAを発現ベクターに組み込み、大腸菌に封入体の形で産生させたのち、精製・再活性化した後化学的に結合させ、抗IL-2受容体Fvフラグメント・des1-7RNaseを作製する。その上でリコンビナント蛋白の白血病細胞に対する殺細胞効果、及びActinomycin Dとの相乗効果をMTT assayを用いて検討する。2.平成15年度研究成果抗IL-2受容体抗体のFv部分のみを精製するため、recombinant phage antibody systemを用い、HとL鎖のcDNAをlinkerでDNA上組み合わせ、それを大腸菌で増幅させた後、抗体を提示するphageに感染させ、phageに新たな蛋白として精製させた。これをIL-2受容体のmonoclonal抗体に親和性のある、マウスの白血病細胞であるMJを用いたELISA法による選択を行ない、その活性を確認した。この蛋白を標識をdetectするカラムを用いて精製し、これにより活性をもった抗体のFv部分のみの単離に成功した。次にこのFv部分とconjugateをするため、RNaseのinhibitor結合部位を排除した1-7desRNaseの精製を開始した。大腸菌内に封入体の形で発現させた蛋白に対し、グラデュエーションカラム法を用いて精製した。

1. Methods: Anti-IL-2 receptor antibody Fv protein cDNA and des1 -7RNase cDNA were developed, and Escherichia coli capsule formation, purification, reactivation, and post-chemical binding were performed. Anti-IL-2 receptor Fv protein cDNA and des1 -7RNase cDNA were produced. The cytocidal effects of the recombinant protein on leukemia cells and the corresponding effects of Actinomycin D were also investigated using the MTT assay. 2. The Fv part of anti-IL-2 receptor antibody was purified by recombinant phase antibody system, H and L lock cDNA linker, DNA assembly, Escherichia coli amplification, antibody detection, phase infection and new protein purification. The affinity and activity of monoclonal antibodies against IL-2 receptors were confirmed by ELISA. The protein marker was successfully isolated from the Fv part of the antibody. Next, the Fv part of RNase inhibitor binding site is excluded. 1-7desRNase purification begins. E. coli in the form of encapsulated protein production in the process of purification