神経膠芽腫における、低酸素状態でのPTEN-AKT経路の役割―神経膠芽腫病態解明の為の基礎的研究―

PTEN-AKT 通路在胶质母细胞瘤缺氧条件下的作用 - 阐明胶质母细胞瘤病理学的基础研究 -

• 批准号: 14770699
• 负责人: 園田 順彦
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770699/
• 关键词: 神経膠腫; PTEN; AKT; Glioblastoma

実験1)ヒト神経膠腫凍結標本より、タンパク質、mRNAを抽出した。得られたタンパク質をSDS-PAGEに展開後、メンブランに転写した。PTEN、AKT、phospho-AKTを用いウエスタンブロッティングを行った。結果として膠芽腫のおよそ60%程度にAKTの過剰発現が認められた。しかしながらPTENタンパク質の発現が減少している症例はかならずしもphospho-AKTの過剰発現している症例とは一致せず、別の経路の異常からphospho-AKTが過剰に発現している可能性が示唆された。次に、実際にPTENタンパク質の発現が減少している患者においてPTEN遺伝子の異常が認められるかを確認するため以下の実験をおこなった。まず摘出標本より抽出したmRNAよりcDNAをRT反応にて作成し、それをtemplateとしてPTENのcDNA領域をPCR法で増幅した。現在、得られたPTEN断片のシークエンスを行っている。実験2)PTENタンパク質が野生型であるNHA E6/E7/hTERT/Rasは低酸素状態においてPTENの発現が増加した。このことよりPTENは低酸素等のストレスにおいて、発現が誘導され細胞周期を停止されるか、あるいはアポトーシスを誘導する可能性が示唆された。したがってPTEN遺伝子に変異のある神経膠芽腫においては低酸素状態でも細胞周期が停止せず、アポトーシスも誘導されないため、虚血に対して耐性がある可能性が考えられた。

1) The expression of DNA, mRNA and protein was detected by PCR. After SDS-PAGE development, the quality of the sample was determined. PTEN, AKT, phospho-AKT are used in the process of production. The results showed that AKT had been found to be more than 60% higher than that of the control group. The occurrence of PTEN is reduced in all cases, and the occurrence of phospho-AKT in all cases is consistent with the occurrence of PTEN. The occurrence of phospho-AKT in all cases indicates the possibility of occurrence of PTEN in all cases. In addition, the occurrence of PTEN gene in patients was reduced, and the occurrence of PTEN gene was confirmed. The expression of PTEN mRNA was amplified by PCR. Now, we've got PTEN. 2)PTEN expression increased in the wild type NHA E6/E7/hTERT/Ras hypotrophic state. The possibility of cell cycle arrest and induction by PTEN is demonstrated. The possibility of cell cycle arrest, loss of tissue induction, and deficiency of blood was examined.