ラット膀胱癌におけるエレクトロポレーション法を用いた遺伝子治療法に関する研究

电穿孔治疗大鼠膀胱癌基因治疗的研究

• 批准号: 14770814
• 负责人: 桑原 朋広
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770814/
• 关键词: 膀胱腫瘍; HS-tk遺伝子; エレクトロポレーション法; マイクロダイアリシス; BTモデルラット; BBN; エレクトロポレーション; ルシフェラーゼ遺伝子; GFP遺伝子

本年度は膀胱腫瘍に対するHS-tk遺伝子導入による自殺遺伝子治療の効果を検討した。8週齢ラットに12週間0.05%BBN含有水を投与した膀胱癌ラットを4群に分けた(各5匹)。1)sham operation群:開腹し膀胱内に溶媒0.1mlのみ注入しエレクトロポレーション施行しない群2)プラスミド単独群:開腹し膀胱内にHS-tk発現プラスミド100μg/0.1mlのみ注入しエレクトロポレーション施行しない群3)エレクトロポレーション単独群:開腹し膀胱内に溶媒0.1mlを注入しエレクトロポレーションを施行した群4)HS-tk遺伝子導入群:開腹し膀胱内にHS-tk発現プラスミド100μg/0.1ml注入しエレクトロポレーション法を施行した群膀胱内への注入は膀胱内の尿を吸引し、頚部をクランプして溶媒またはプラスミドを26G針で注入した。エレクトロポレーション法は膀胱内注入直後に、幅1cmの電極で挟み込み(電極の間隔2mm)、50V、20msec、1Hz、4パルスの条件で電気刺激。極性を変えて再度電気刺激した。腹壁は閉創した。翌日より10日間、ガンシクロビル(GCV)10mg/1日1回を腹腔内投与(GCVはHS-tk遺伝子がつくり出すHS-tkにより細胞障害性発揮)。12日目に堵殺し、膀胱を摘出し、20%ホルマリンで固定、それぞれ同じスライスでHE染色とTUNEL染色を行い、necrosis、apoptosisの有無を検討することとした。現在、SRLへ委託して結果待ちの状態である。

This year, we will discuss the results of HS-tk gene introduction and suicide gene therapy for bladder cancer. 0.05% BBN at 8 weeks and 5 at 12 weeks 1)sham operation group: open bladder 0.1ml of solvent injection group 2) select group: Open bladder HS-tk discovery range up to 100μg/0.1ml for injection into the bladder 0.1ml of solvent was injected into the bladder during laparotomy. Group 4)HS-tk gene introduction group: Open bladder HS-tk discovery: 100 μ g/0.1ml injection: 100μg/0.1ml The solvent was injected into the 26-gauge syringe. The method was based on the following conditions: 1 cm electrode width, 5 V, 20msec, 1 Hz, 4 Hz. Polarity changes, electrical stimulation occurs. The abdominal wall is closed. The next day, 10 days, GCV 10mg/day, 1 cycle, intraperitoneal administration (GCV HS-tk gene). On the 12th, the bladder was removed, 20% of the bladder was fixed, and the HE staining was performed, necrosis, and apoptosis were discussed. Now, SRL