機能回復を目的とした反回神経麻痺への遺伝子治療

以功能恢复为目的的喉返神经麻痹基因治疗

• 批准号: 14770922
• 负责人: 茂呂 和久
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770922/
• 关键词: 遺伝子治療; 神経栄養因子; 反回神経麻痺; 機能回復

治療遺伝子(IGF-1・GDNF・BDNF)導入後のmotor unitの機能回復の検討Sprague-Dawleyラット反回神経挫滅モデルを用いて、治療遺伝子(IGF-1・GDNF・BDNF)を含む非増殖型アデノウイルスベクター(AxCAhIGF-1・AxCAhGDNF・AxCAmBDNF)を(1)挫滅部位より中枢側の軸索(2)挫滅部位軸索(3)喉頭筋の各3ヶ所へ導入した。導入から2、4、8週後に神経伝導速度の測定・筋電図によるdenervation potentialの回復評価を行い、潅流固定後に(1)運動神経細胞(2)軸索(3)筋肉を含む各部位を摘出し、凍結組織切片を作製した。各組織切片をX-gal染色および抗β-galactosidase抗体を用いて免疫染色を施行し、各々での遺伝子発現強度を観察した。また、ATPase染色を施行した後に筋断面積をコンピューター解析し、左右比較検討した。遺伝子の発現判定は、(1)運動神経細胞(2)軸索(3)筋肉を含む各部位で抗IGF-1抗体・抗GDNF抗体・抗BDNF抗体を用いた免疫染色法か、あるいは同部位の組織よりRNA抽出後RT-PCR法を施行しmRNA発現の証明により判定した。各治療遺伝子導入によりmotor unitの明らかな機能回復が認められた。

The functional recovery model of motor unit after the introduction of therapeutic gene (IGF-1·GDNF·BDNF) is discussed. The therapeutic gene (IGF-1·GDNF·BDNF) is included in the non-proliferative type of axons (AxCAhIGF-1·AxCAhGDNF·AxCAmBDNF).(1) The axons at the injured position are at the central side.(2) The axons at the injured position are at the 3 positions of the laryngeal muscles. 2, 4 and 8 weeks after introduction, the nerve conduction velocity was measured, and the tendon denervation potential was evaluated. After the flow was fixed,(1) the motor nerve cells were extracted,(2) the axons were extracted, and the frozen tissue sections were prepared. X-gal staining and anti-β-galactosidase antibody were used in each tissue section to detect the intensity of expression of each protein. After the enzyme staining, the cross-section area of the tendon was analyzed. The detection of mRNA expression was determined by (1) motor neurons,(2) axons,(3) muscles, and tissues containing anti-IGF-1 antibodies, anti-GDNF antibodies, and anti-BDNF antibodies. Each treatment gene is introduced into the motor unit and the function is restored.