軟骨形成不全症の原因遺伝子(Evc)による軟骨細胞の増殖・分化制御機構の解析

软骨发育不全基因（Evc）控制软骨细胞增殖和分化的机制分析

基本信息

批准号：
14771002
负责人：
辻岳人
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771002/
关键词：
Evc Ellis-van Creveld症候群軟骨細胞 Ellis-van Creveld

项目摘要

昨年度の研究によりEvc遺伝子の前肥大軟骨細胞における強い発現が確認され、Evc遺伝子が軟骨細胞の分化に関与することが推測された。本年度においては、さらに軟骨細胞における機能的役割を明らかにすることを目的として解析をおこなった。まず、未分化軟骨細胞株であるATDC5にEvc遺伝子を安定的に過剰発現させる細胞を樹立し、その細胞の変化について解析することを試みた。単離した大半の細胞は増殖活性が非常に悪く、解析するまでの細胞数には至らなかった。最終的に過剰な発現が認められたのは1系統のみであった。通常、分化誘導培地でATDC5を培養しなければ軟骨細胞へ分化しないが、この細胞系統は非分化誘導培地にもかかわらず細胞凝集を形成しながら増殖した。また細胞の形態も繊維芽細胞様から丸みを帯びた軟骨細胞様に変化していた。これらの結果から、Evc遺伝子の過剰発現により軟骨細胞への分化が誘導されている可能性が考えられた。近年、Ellis-van Creveld症候群の原因遺伝子として本研究で取り上げたEvc遺伝子だけでなく、新たにLim-bin(Lbn)遺伝子が原因遺伝子であることが明らかにされた。さらに、両遺伝子は染色体上の位置が近接していることから、機能的になんらかの関連性が推測されることから、各組織における発現パターンについて解析を行った。各週齢のラット脛骨骨端および4週齢の肝臓、脳、肺、心臓、腎臓、骨格筋について半定量的RT-PCRによりEvcとLbn遺伝子の発現パターンを解析した。その結果、両遺伝子とも、すべての組織で類似した発現パターンを示した。これらの結果は、両遺伝子の関連性をさらに示唆する結果であり、軟骨細胞においても機能的な関連性があるものと考えられた。本研究により、Evc遺伝子が軟骨細胞の分化誘導に関与すること、またその作用はLbn遺伝子と関連性が推測され、軟骨細胞分化の制御機構でのEvc遺伝子の重要性が初めて示された。

去年的一项研究证实了EVC基因在胸部内软骨细胞中的强烈表达，并推测EVC基因参与软骨细胞分化。今年，进行了分析，目的是进一步阐明软骨细胞中的功能作用。首先，我们建立了一个细胞，该细胞稳定地过表达了未分化的软骨细胞系ATDC5中的EVC基因，并试图分析细胞中的变化。大多数孤立的细胞的增殖活性非常低，直到分析之前才达到细胞数量。最后，只观察到一条线是过表达的。通常，ATDC5不在分化诱导培养基中培养，但是尽管没有分化的诱导培养基，但在形成细胞聚集的同时，该细胞系生长。细胞的形态也从类似成纤维细胞状的变成圆形软骨细胞变化。这些结果表明，EVC基因的过表达可能诱导分化为软骨细胞。近年来，已经揭示了本研究中提到的EVC基因不仅是Ellis-Van Creveld综合征的致病基因，而且Lim-bin（LBN）基因也是致病基因。此外，由于两个基因都接近彼此的染色体位置，因此可以推断出一些功能关系，并分析了每个组织中的表达模式。 EVC和LBN基因的表达模式通过半定量RT-PCR分析了每个周大的大鼠以及四个星期大的肝脏，脑，肺，心脏，心脏，肾脏和骨骼肌的表达模式。结果，两个基因在所有组织中均表现出相似的表达模式。这些结果进一步表明了两个基因之间的关系，并被认为在软骨细胞中也具有功能关系。这项研究表明，EVC基因与软骨细胞分化的诱导有关，其作用与LBN基因有关，这首次表明EVC基因在控制软骨细胞分化的机制中的重要性。