軟骨形成不全症の原因遺伝子(Evc)による軟骨細胞の増殖・分化制御機構の解析

软骨发育不全基因（Evc）控制软骨细胞增殖和分化的机制分析

• 批准号: 14771002
• 负责人: 辻 岳人
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771002/
• 关键词: Evc; Ellis-van Creveld症候群; 軟骨細胞; Ellis-van Creveld

昨年度の研究によりEvc遺伝子の前肥大軟骨細胞における強い発現が確認され、Evc遺伝子が軟骨細胞の分化に関与することが推測された。本年度においては、さらに軟骨細胞における機能的役割を明らかにすることを目的として解析をおこなった。まず、未分化軟骨細胞株であるATDC5にEvc遺伝子を安定的に過剰発現させる細胞を樹立し、その細胞の変化について解析することを試みた。単離した大半の細胞は増殖活性が非常に悪く、解析するまでの細胞数には至らなかった。最終的に過剰な発現が認められたのは1系統のみであった。通常、分化誘導培地でATDC5を培養しなければ軟骨細胞へ分化しないが、この細胞系統は非分化誘導培地にもかかわらず細胞凝集を形成しながら増殖した。また細胞の形態も繊維芽細胞様から丸みを帯びた軟骨細胞様に変化していた。これらの結果から、Evc遺伝子の過剰発現により軟骨細胞への分化が誘導されている可能性が考えられた。近年、Ellis-van Creveld症候群の原因遺伝子として本研究で取り上げたEvc遺伝子だけでなく、新たにLim-bin(Lbn)遺伝子が原因遺伝子であることが明らかにされた。さらに、両遺伝子は染色体上の位置が近接していることから、機能的になんらかの関連性が推測されることから、各組織における発現パターンについて解析を行った。各週齢のラット脛骨骨端および4週齢の肝臓、脳、肺、心臓、腎臓、骨格筋について半定量的RT-PCRによりEvcとLbn遺伝子の発現パターンを解析した。その結果、両遺伝子とも、すべての組織で類似した発現パターンを示した。これらの結果は、両遺伝子の関連性をさらに示唆する結果であり、軟骨細胞においても機能的な関連性があるものと考えられた。本研究により、Evc遺伝子が軟骨細胞の分化誘導に関与すること、またその作用はLbn遺伝子と関連性が推測され、軟骨細胞分化の制御機構でのEvc遺伝子の重要性が初めて示された。

In the past year's study, strong findings in the differentiation of chondrocytes from Evc genes were confirmed, and the relationship between Evc genes and chondrocyte differentiation was speculated. This year, the function of chondrocytes was analyzed. ATDC-5 is a cell line with undifferentiated chondrocytes. It is a cell line with undifferentiated chondrocytes. It is a cell line with undifferentiated chondrocytes. Most of the cells in the cell culture are very active, and the number of cells in the cell culture is very high. Finally, the system was discovered. In general, ATDC5 is cultured in differentiation induced culture, and chondrocytes are cultured in differentiation induced culture. Cell systems are cultured in non-differentiation induced culture, and cell aggregates are formed. The morphology of the cells is different from that of the chondrocytes. The results showed that the differentiation of chondrocytes could be induced in vitro. In recent years, Ellis-van Creveld syndrome has been identified as a causal factor in this study, and Lim-bin(Lbn) syndrome has been identified as a causal factor. In addition, the position on the chromosome of the gene is close to each other, the relationship between the function and the gene is inferred, and the occurrence of the gene in each tissue is analyzed. Semi-quantitative RT-PCR was used to analyze the expression of Evc and Lbn genes in liver, lung, heart, kidney and bone tissues from week 1 to week 4. The results of the study were similar to those of the previous study. The results of this study are as follows: 1. The relationship between chondrocytes and their function is as follows: This study suggests that Evc gene plays an important role in the regulation of chondrocyte differentiation.

项目成果

Nakamura, H., Tsuji, T., Hirata, A., Yamamoto, T.: "Role of osteoclast extracellular signal-regulated kinase (ERK) in cell survival and maintenance of cell-polarity."J.Bone Miner.Res.. 18(7). 1198-1205 (2003)

Nakamura, H.、Tsuji, T.、Hirata, A.、Yamamoto, T.：“破骨细胞外信号调节激酶 (ERK) 在细胞存活和细胞极性维持中的作用。”J.Bone Miner.Res。

Nakamura, H., Tsuji, T., Hirata, A., Yamamoto, T: "Localization of Osteoprotegerin(OPG)on Bone Surfaces and Cement Lines in Rat Tibia"J.Histochem.Cytochem.. 50(7). 945-953 (2002)

Nakamura, H.、Tsuji, T.、Hirata, A.、Yamamoto, T：“骨保护素 (OPG) 在大鼠胫骨骨表面和骨水泥线上的定位”J.Histochem.Cytochem.. 50(7)。