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舌下神経切断後の神経細胞死の新たな抑止法の開発

开发一种抑制舌下神经横断后神经细胞死亡的新方法

基本信息

批准号：
14771146
负责人：
馬場信行
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、損傷された神経細胞がどのような経過をたどり、神経細胞死へと向かうのかを分子組織化学的に解析するとともに、人為的にその神経細胞死を阻止することができるかを検討することである。そのために神経軸索切断モデルを経時的に作製し、神経細胞を免疫組織化学、分子組織化学的手法をもって神経細胞死に関与する遺伝子群の検索を行った。1)ラット舌下神経切断モデルの作成オスWistar系ラット(7週齢)を腹腔内麻酔し、顎下部皮膚を切開、右舌下神経を露出。神経再生が起こらないように舌下神経を5mm切断除去し創部を縫合。神経切断後1,2,3,7,14,28日のラット延髄を屠殺、潅流固定後、摘出し、パラフィン標本を各3匹ずつ作製した。2)免疫組織学化学的検索そこで軸索切断された舌下神経がどのような経過をたどるのか経時的に免疫組織化学的検索を行った。細胞死関連遺伝子蛋白に関して、BCL-2ファミリーのBADに着目した。最近の報告によるとBADのリン酸化による影響が、神経栄養因子阻害による神経細胞死に深く関わっている。その他現在神経細胞死に関与すると言われている遺伝子ced-3/ICE系、Rasを免疫組織化学的手法およびin situ hybridyzation法を用いて検討した。現在のところ、一部条件整わずに未だデータがそろっていない。条件がそろった時点で、あらかじめそれらの関連蛋白の抗体を舌筋に注射し、軸索輸送に乗って延髄に取り込ませる。その後、神経軸索を切断して、形態的、TUNEL法により神経細胞死を検索する。神経細胞死が抑制されたかを検討することとしている。

The purpose of this study is to analyze the molecular histochemistry of damaged neurons and prevent them from dying. In addition, the method of immunohistochemistry and molecular histochemistry of neurocytes is used to detect the relationship between neurocyte apoptosis and gene subgroup. 1) Sublingual nerve cut off and made into a Wistar system (7 weeks), abdominal anesthesia, incision of the lower jaw skin, exposure of the right sublingual nerve. The nerve regeneration starts at 5mm and the wound is removed. 1, 2, 3, 7, 14, 28 days after nerve disconnection, 3 days after nerve disconnection, 3 days after nerve disconnection. 2)Immunohistochemical examination of axonal transection of the sublingual nerve Cell death related gene protein, BCL-2 and BAD Recent reports indicate that the effects of BAD on neuronal acidification, neurotrophic factor inhibition, and neuronal cell death are deeply related. The expression of Ced-3/ICE and Ras in human brain cells was studied by immunohistochemical method. Now we have to adjust the conditions. Conditions include time, time. After the injury, the nerve axis is cut off, the shape is changed, and the nerve cell death is detected by TUNEL. Neurocellular death is a serious problem.