オキシトシナーゼサブファミリーの細胞内膜系局在の意義およびそのメカニズムの解明

阐明催产素酶亚家族内膜定位的意义和机制

• 批准号: 14771302
• 负责人: 服部 明
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771302/
• 关键词: 脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼ; 胎盤性ロイシンアミノペプチダーゼ; 白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ; オキシトシナーゼサブファミリー; MHCクラスI抗原ペプチド; 小胞体内腔可溶性タンパク質; 小胞体貯留機構; 酵母Two-Hybrid法; 脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチターゼ; 小胞体; 内在性抗原生成; インターフェロン-γ; ウィルス感染; タンパク質結晶化; X線結晶構造解析

昨年度の解析において、脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼ(A-LAP)が小胞体内腔においてMHCクラスI抗原ペプテドの生成酵素として機能することを明らかにした。本年度は、本酵素の小胞体内腔での貯留機構について解析を行った。A-LAPの分子内には小胞体内腔可溶性タンパク質の分子内に認められる小胞体貯留配列は存在していなかった。そこで、A-LAP分子内の小胞体局在に必要なドメインの絞込みを行うため、A-LAPの類縁酵素であり小胞体には貯留しない胎盤性ロイシンアミノペプチダーゼ(P-LAP)/オキシトシナーゼと本酵素とのキメラタンパク質を種々作製し、その細胞内局在の検討を行った。その結果、A-LAPの小胞体貯留には、485番から615番までの分子内領域が重要であることが明らかとなった。A-LAPの小胞体貯留機構として,本領域に他の小胞体タンパク質が結合することによる可能性が考えられる。そこで、本領域に結合しうる小胞体タンパク質を酵母Two-Hybrid法を用いて検索したその結果、候補タンパク質としてo-マンノース転移酵素の類縁分子が同定された。現在、A-LAPと本候補分子とのin vivoにおける結合の確認、各タンパク質分子の結合領域の同定、さらにはA-LAPの生理機能である抗原ペプチドの生成能に本分子がどのようにして関与しているかについて検討を進めている。A-LAPおよびP-LAPと相同性の高い新規酵素の単離についても行った。この結果、白血球細胞から新しい酵素遺伝子の単離に成功し、これを白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ(L-RAP)と名づけた。これら3酵素は互いに極めてよく似ており、さらにヒトの各酵素遺伝子は第5染色体上でクラスターを形成していることから、本酵素群はM1アミノペチダーゼファミリーの中で「オキシトシナーゼサブファミリー」を形成していると提唱するに至った。また、L-RAPの生理機能について解析を行ったところ、L-RAPもA-LAPと同様にMHCクラスI抗原ペプチドの生成酵素として機能しうることを見い出した。

In the past year, the analysis of adipocytes has revealed that the origin of adipocytes (A-LAP) is related to the function of MHC antigen-producing enzymes in the intracellular cavity of adipocytes. This year, the enzyme was analyzed by the storage mechanism in the microsomal cavity. A-LAP is an intracellular soluble protein and an intracellular soluble protein. In addition, A-LAP is a kind of enzyme that can be stored in small cells. As a result, A-LAP microcellular storage is important in the molecular domain of 485 ° C and 615 ° C A-LAP small cell storage mechanism, the field of other small cell storage mechanism for the possibility of this study The results of the Two-Hybrid method for the identification of microcellular proteins and their derivatives in this field are described. Now, A-LAP and this candidate molecule in vivo binding confirmation, each protein binding domain is determined, and A-LAP physiological function, antigen selection and production ability of this molecule in the middle of the study. A-LAP and P-LAP are highly similar to each other. As a result, white blood cells are isolated from new enzymes, and white blood cells are isolated from new enzymes (L-RAP). The three enzymes are located in the middle of each other, and the enzyme gene is formed on chromosome 5. The enzyme group is located in the middle of M1. The physiological function of L-RAP is analyzed and the function of L-RAP and A-LAP is analyzed.

项目成果

Masuda S. et al.: "Involvement of the V2 receptor in vasopressin-stimulated translocation of placental leucine aminopeptidase/oxytocinase in renal cells"Europian Journal of Biochemistry. 270. 1988-1994 (2003)

Masuda S.等人：“肾细胞中加压素刺激的胎盘亮氨酸氨基肽酶/催产素酶易位中V2受体的参与”《欧洲生物化学杂志》。

服部 明, 辻本雅文: "オキシトシナーゼサブファミリー-M1アミノペプチダーゼの新しいサブファミリーの同定とその生理機能"生化学. 75. 1225-1230 (2003)

Akira Hattori，Masafumi Tsujimoto：“催产素酶亚家族新亚家族 - M1 氨肽酶的鉴定及其生理功能”生物化学 75. 1225-1230 (2003)。

Saric et al.: "An IFN-γ-induced aminoopeptidase in the ER, ERAP1, trims precursors to MHC class I-presented piptides"Nature Immunology. 3. 1169-1176 (2002)

Saric 等人：“ER 中的 IFN-γ 诱导的氨基肽酶，ERAP1，修剪 MHC I 类呈递的肽的前体”《自然免疫学》3. 1169-1176 (2002)。