グリア細胞の分化・発達を指標とした化学物質の新規毒性影響評価法の開発研究

以胶质细胞分化发育为指标评价化学物质毒性作用新方法的研究

• 批准号: 14771325
• 负责人: 足立 達美
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: National Institute for Minamata Disease
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771325/
• 关键词: アストロサイト; オリゴデンドロサイト; グリア繊維酸性蛋白質; メチル水銀; 分化; 発達; 血小板由来増殖因子; グリア細胞; グリア線維酸性蛋白質; O1; 白血球遊走阻害因子; 骨形成因子

今年度は、化学物質の毒性影響の指標としてのグリア細胞の分化・発達の有用性を推察するために、メチル水銀をモデル化合物として、ラット胎仔脳初代培養系におけるグリア細胞の分化・発達に及ぼす影響を調べた。まず、胎生18日目のラット大脳半球から調製した初代培養細胞を甲状腺ホルモン(TH)を含む無血清培地で培養し、メチル水銀をシステイン抱合体として曝露し、4日間の生細胞数の変化をコントロール(システインのみを曝露)と比較検討した。その結果、メチル水銀300nM以上を曝露するとコントロールに比べ、生細胞数が低下することが明らかになった。そこで、次に、メチル水銀30および300nMを曝露し、アストロサイトのマーカーであるグリア繊維酸性蛋白質(GFAP)の発現量とO1陽性細胞(オリゴデンドロサイト)の数の変化を調べた。GFAP発現量は、メチル水銀(30および300nM)曝露の2および4日後のいずれの時点においてもコントロールと差は見られなかった。一方、オリゴデンドロサイトの数は、メチル水銀30nMの曝露ではコントロールと顕著な差は見られなかったが、300nMではコントロールに比べ低い値を示した。さらに、細胞をTHおよび血小板由来増殖因子を含む無血清培地で培養し、メチル水銀(30nM)曝露後のオリゴデンドロサイトの出現のタイミングを調べたが、コントロールと差は見られなかった。以上の結果から、メチル水銀は細胞死を誘導しない低用量の曝露ではグリア細胞の分化・発達にほとんど影響しないことが示唆される。また、ラット胎仔脳初代培養系におけるグリア細胞の分化・発達が化学物質の毒性影響の指標として有用であることを論じるためには、メチル水銀をモデル化合物として用いた本研究の結果のみでは不十分であり、さらにデータの蓄積が必要と考えられる。

This year, we investigated the usefulness of indicators of the toxic effects of chemicals and the differentiation and development of ovarian cells, and also investigated the effects of mercury compounds on the differentiation and development of ovarian cells in primary fetal culture lines. The number of primary cultured cells in the 18-day-old fetal hemisphere was modulated by thyroid hormone (TH) and cultured in serum-free medium. The number of primary cultured cells in the 4-day-old fetal cell population was changed by thyroid hormone exposure. The results showed that the exposure to mercury was higher than 300nM, and the growth rate was lower than that of the control group. The expression of GFAP and the number of O1 positive cells were modulated by exposure to mercury at 30 nM and 300nM. GFAP emission is different from mercury (30 nM to 300nM) exposure at 2 to 4 days after exposure. The amount of mercury at 30nM was lower than that at 300nM. In addition, cell growth factors and platelet-derived growth factors were found in serum-free culture, and after exposure to mercury (30nM), there was a change in the appearance of cell growth factors. These results indicate that mercury can induce cell death at low doses, and can affect cell differentiation and development. The results of this study show that the differentiation and development of fetal cells in primary culture systems are useful indicators of toxic effects of chemicals.