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膵臓及び甲状腺に特異的に発現する内在性レトロウイルスの機能解析

胰腺和甲状腺特异性表达的内源性逆转录病毒的功能分析

基本信息

批准号：
14771331
负责人：
杉本潤
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

膵臓及び甲状腺で発現しているHERV遺伝子(ERVE1)の生理的役割を明らかにするため、ERVE1特異的モノクローナル抗体の作製を目指した。本年度はスクリーニング精度を上げるため、スロットブロット法を応用した検出法を取り入れ、2880のハイブリドーマのスクリーニングを行った。この結果、抗原としたERVE1-GST融合蛋白のGSTに対するハイブリドーマ細胞を2クローン単離・同定することが出来たが、ERVE1に対するハイブリドーマ細胞は得られなかった。トータルで約1万のハイブリドーマを検定したことになるが、目的のハイブリドーマ細胞が単離できない原因は明らかではない。現段階でこの問題に対処する方法として、より一層大規模なスクリーニングの遂行が必要と考える。迅速な目的(膵臓または甲状腺組織におけるERVE1タンパク発現の有無の確認)達成のため、平行してポリクローナル抗体の作製を行った。得られたポリクローナル抗体は、免疫沈降、ウエスタンブロット法のいずれにも応用可能な抗体であった。さらに、このERVE1特異的ポリクローナル抗体を用いて、ヒト膵臓・甲状腺の切片に対し免疫組織染色法を行った。幾つかの条件を検討したが、現在までのところ比較対照血清と明瞭に区別される染色シグナルは得られていない。また、膵臓・甲状腺組織由来の細胞抽出液を用いてウエスタンブロット法を試みた結果、予想されるサイズの位置に弱いシグナルを認めた。以上の結果から、in vivoの系で特異的シグナルを検出できなかった原因は、サンプル個人間での発現の違い、標本処理までの時間経過による目的蛋白の変成、または現条件での免疫組織染色法の検出限界などが考えられる。今後、in vivoにおける発現の有無を明らかにするため、複数のサンプルを検討する、複数の抗体を作製・吟味するなどの対策が必要と思われる。

The physiological function of HERV gene (ERVE1) in the development of thyroid and thyroid gland is clearly described. The production of ERVE1-specific antibodies is also indicated. This year, the accuracy of the search engine is improved, and the search engine is used to select the search engine. The result is that the ERVE1-GST fusion protein can be used to express the protein. About 10,000 people were killed in the attack. At this stage, it is necessary to investigate the method of solving this problem. The rapid achievement of the goal (confirmation of the presence or absence of ERVE1 receptor in thyroid tissue) and the parallel production of polyclonal antibodies were carried out. It is possible to use antibodies in different ways. In addition, ERVE1-specific anti-thyroid antibodies were used, and thyroid tissue sections were stained by immunohistochemistry. A few conditions are discussed, and now they are compared with the serum and the difference between the staining conditions and the results. The cell extract from thyroid tissue was used to test the results and predict the location of thyroid tissue. The above results show that the detection limits of target protein production and detection conditions in vivo and in vivo are different from those in vivo and in vivo. In the future, the presence or absence of in vivo antibodies will be discussed, and strategies will be considered.