腺組織に発現するヒト内在性レトロウイルスのMHC抗原提示抑制機構の検証

腺组织中表达的人内源性逆转录病毒的MHC抗原呈递抑制机制的验证

• 批准号: 16790198
• 负责人: 杉本 潤
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790198/
• 关键词: ヒト内在性レトロウイルス; 膵臓; 甲状腺; ポリクローナル抗体

本研究の目的は、膵臓及び甲状腺で発現しているHERV遺伝子(HERVE1)の生体内での機能を明らかにすることである。しかし、この目的の前提として、膵臓または甲状腺におけるERVE1タンパクの存在が必要不可欠である。前年度までに作製を終了したERVE1ポリクローナル抗体では、膵臓、甲状腺特異的なタンパク発現を検出することが出来なかった。そこで今回、抗原をERVE1アミノ酸配列由来の合成ペプチド(18アミノ酸)とし、新たにポリクローナル抗体を作製した。これら二種類のポリクローナル抗体を、免疫沈降法、ウエスタンブロット法に組合せ、さらに非特異的な検出を抑制する二次抗体、検出試薬を応用することで、ヒト各種組織由来細胞抽出液からのERVE1タンパクの検出を試みた。今回も、信頼性を向上させるため糖鎖切断酵素処理を行い、予想されるシグナルを検出したところ、胎盤でのみ特異的なシグナルを確認することが出来た。ただ、得られたシグナルはコントロールとしたERVE1強制発現細胞のシグナルと、わずかなサイズのずれが認められている。この矛盾を解決するため、胎盤で確認されたシグナルに相当するバンドをアミノ酸解析により明らかにしようと考えた。そこで免疫沈降後のタンパク質を銀染色法で確認したが、免疫沈降法の際に用いた抗体の軽鎖にオーバーラップすることと、元々のタンパク量が銀染色法では検出できないくらいの量であることから、現段階ではアミノ酸解析を行うことは困難であることが明らかとなった。シグナルサイズの違いの解釈として、ERVE1タンパクに存在するシグナル配列が胎盤で特異的に切断されている可能性が考えられるが、現在のところその証明には至っていない。また、本来は膵臓、甲状腺に強く発現すると予想されるタンパクが胎盤でのみ確認されたことは再確認が必要であり、さらに各臓器の検体数を増やし検討する必要があると考える。

The aim of this study was to clarify the function of HERV gene (HERVE1) in vivo in the development of thyroid gland, thyroid gland and thyroid gland. The purpose of this is to ensure that the ERVE1 does not exist. The previous year's production was terminated. ERVE1 was detected by anti-thyroid antibody detection. This time, the antigen ERVE1 was synthesized from the acid sequence, and the new antibody was prepared. These two types of antibodies, immuno-sedimentation, anti-ERVE 1 and anti-ERVE 2 are combined to detect non-specific secondary antibodies, anti-ERVE 2 and anti-ERVE 3 in various tissues derived from cell extracts. In this case, the information is up, and the sugar lock enzyme processing is in progress. In this case, the placenta specific enzyme processing is confirmed. The ERVE1 forces the cells to move forward and move forward. This conflict is resolved by identifying the appropriate source of acid. After immunoprecipitation, the amount of antibody was determined by silver staining method. At this stage, the amount of antibody was determined by silver staining method. The possibility of placenta-specific disconnection of ERVE1 is examined and proved. The number of samples of each organ should be increased to confirm whether it is necessary to reconfirm or not.