尿路感染症を引き起こす大腸菌(E.coli)の簡易迅速検査法の開発

开发一种简单快速检测引起尿路感染的大肠杆菌 (E.coli) 的方法

• 批准号: 14771347
• 负责人: 中村 雅彦
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771347/
• 关键词: 大腸菌; 病原因子; Type1 pili; 迅速検査法

1.PCR法による病原因子遺伝子の分布解析患者尿および対照として健常人糞便から分離された大腸菌計402株のType1 pili、P pili、S pili、CNF(cytotoxic necrotizing factor)、SAT(secreted autotransporter toxin)の5つの病原因子の遺伝子の保有状況を調べた結果、Type1 pili遺伝子保有率はともにほぼ100%(それぞれ97.0、97.2%)でありType1 pili遺伝子検出を用いた病原性評価は困難であると考えられた。それ以外の4因子は尿由来株と糞便株との保有率の間に一定の有意差は見られた。特にP pili遺伝子の保有率は44.6%と高かった。尿由来株の保有率はP pili、S pili、CNF、SAT遺伝子の順に44.6%、12.5%、16.9%、23.3%であった。糞便株では19.8%、3.8%、2.8%、8.5%であった。2.発現レベルでのType1 piliの迅速検査法の検討Type1 piliを尿から直接検出することで大腸菌による尿路感染症を迅速に検査する方法を検討した。Type1 piliのreceptorは膀胱の上皮細胞上に広く分布するmannoseであることがわかっている。そこでmannose残基を表面にもつモルモット赤血球と大腸菌との凝集反応を、実際の尿路感染症患者尿および健常者尿を直接検体に用いて検討した。その結果、培養検査との比較から感度85.7%、特異性56.1%であり、今回検討の方法では偽陽性率が高く、このままでは実際に臨床応用することは困難であると考えられた。これは赤血球表面に多数存在する糖鎖やタンパク質の影響を受けたためと推察された。現在、mannoseをコーティングしたラテックス粒子を用い、mannose以外の因子の影響を受けないような凝集反応を考案中である。

1. PCR analysis of pathogenic factor gene distribution in urine samples of patients and control samples of healthy people. 402 strains of E. coli were isolated from feces of patients with Type1 pili, P pili, S pili and CNF.(cytotoxic necrotizing factor)、SAT (Secreted autotransporter toxin) The retention status of 5 pathogenic factors was adjusted. The retention rate of Type 1 chili virus was 100%(97.0, 97.2%). There were some intentional differences in the retention rates of four factors other than urine derived strains and fecal strains. The retention rate of P. pili seeds was 44.6% and high. The retention rates of the original plants were 44.6%, 12.5%, 16.9% and 23.3% respectively. Fecal plant 19.8%, 3.8%, 2.8%, 8.5%. 2. Rapid detection of type 1 pili and detection of type 1 pili in urine. Type1 pili receptor is distributed on the epithelial cells of the urinary bladder. The mannose residues were detected in the urine of patients with urinary tract infections and in the urine of healthy individuals. Results: The sensitivity and specificity of culture test were 85.7% and 56.1%, respectively. The false positive rate was high and the clinical application was difficult. The presence of sugar on the surface of red blood cells is largely influenced by the presence of sugar. Now, mannose particles are affected by factors other than mannose.