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腸炎ビブリオの病原因子T3SS1の遺伝子発現誘導条件の検討

副溶血弧菌毒力因子T3SS1基因表达诱导条件的检测

基本信息

批准号：
21K13496
负责人：
射場仁美
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Nagasaki International University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K13496/
关键词：
腸炎ビブリオ食中毒 T3SS

项目摘要

腸炎ビブリオは日本で分離・同定された食中毒原因菌である。2セットの3型分泌装置であるT3SS1とT3SS2を保有し、病態形成に重要な役割をもつことが明らかとなっているT3SS2についてはこれまでの研究で、病態との関わりが明らかとなっているが、T3SS1については未だ、発現が誘導される条件や、病態との関わりが明らかとなっていない。本年度は、腸炎ビブリオが保有するT3SS1の遺伝子発現が誘導される条件の検討をGFPの蛍光強度を測定することで可能となるか評価した。T3SS1の遺伝子発現はDMEMでの培養で上昇することが報告されているため、T3SS1関連遺伝子であるvscQのプロモーターコントロール下でGFPを発現させた腸炎ビブリオをDMEMで培養後、GFPの蛍光強度を測定した。その結果、3%NaClでの培養と比較して、有意に蛍光強度が高くなった。また、T3SS1のポジティブレギュレーターのExsA、ネガティブレギュレーターのExsDのそれぞれの遺伝子欠損株にvscQ pro-gfpを導入した結果、ΔExsAではDMEMで培養しても、GFP蛍光強度が上昇せず、ΔExsDでは上昇することが確認できた。これらの結果から、GFPの蛍光強度を測定することで、T3SS1遺伝子の発現状況を評価できることが確認できた。T3SS2は胆汁酸での遺伝子発現上昇が起こることが報告されているので、T3SS1が影響を受けるのかの評価を行ったところ、胆汁酸ではT3SS1の遺伝子発現に影響がないことが明らかになった。また、Hela細胞にvscQのプロモーターコントロール下でGFPを発現させた菌を感染させたところ、細胞と接している菌でGFPの蛍光強度が上昇する結果が得られた。以上より、宿主細胞との接着により、T3SS1遺伝子の発現が誘導される可能性が示唆された。

Enteritis is isolated from Japanese food poisoning. T3SS1 and T3SS2 are important for maintaining and pathologically forming secretory devices. T3SS 2 and T3SS 2 are important for maintaining and pathologically forming secretory devices. T3SS1 and T3SS2 are important for pathologically forming secretory devices. This year, we will discuss the conditions for the development of T3SS1 and determine the fluorescence intensity of GFP. T3SS1 gene expression was increased in DMEM culture and T3SS1-related gene expression was increased in DMEM culture. GFP gene expression was increased in DMEM culture and GFP fluorescence intensity was measured. Results, 3% NaCl culture, intentionally high light intensity The results of introducing vscQ pro-gfp into the defective strain of T3 SS1, ExsA, ExsD and ExsD were confirmed. ExsA was cultured in DMEM, GFP light intensity increased, and ExsD increased. The results of this study include the determination of GFP fluorescence intensity and the evaluation of T3SS1 fluorescence. T3SS2 Bile acid gene expression increased, T3SS1 was affected, and T3SS1 gene expression increased. GFP was detected in Hela cells and the fluorescence intensity of GFP was increased in Hela cells. The above, host cell and host cell adhesion, T3SS1 gene expression and induction of the possibility of this is demonstrated.