DNA複製に伴うクロマチン構築機構及びその生命システムにおける意義の解明

阐明与 DNA 复制相关的染色质构建机制及其在生命系统中的意义

• 批准号: 14704025
• 负责人: 柴原 慶一
• 金额: $ 8.07万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14704025/
• 关键词: クロマチン; ヒストン; DNA複製; CAF-1

DNA複製フォークの通過に伴い一旦解離するヒストンは、新規に合成されるヒストンと共に複製後のDNA上に速やかに分配される。このDNA複製に伴うヌクレオソーム構築には、CAF-1やASF1といった特異なヒストン結合蛋白質群が関与する。我々はこれまで、この複製に伴うヌクレオソーム構築反応を解析するためのin vitroアッセイ系を世界に先駆け確立し、複製必須因子であるPCNAが、CAF-1による複製DNAと非複製DNAの識別に関与することなどを明らかにした。しかしながら、未同定活性の精製はもとより、CAF-1,ASF1がこの反応の中で果たす役割など反応機構の理解は進んでいなかった。今年度は、必要因子の同定・精製・解析を進める目的で、同ヌクレオソーム構築反応が、ヒストンH3.H4(H3H4)の配置、ヒストンH2A.H2B(H2A2B)の配置の2段階で進行することに着目し、個々のステップの進行に必要な活性の同定・解析を進めるための系を立ち上げた。ヒト293細胞由来のS100抽出液を、Phosphocelluloseカラムのある画分中には、DNA複製及びヌクレオソーム構築に必要なH2A.H2B以外の全ての活性が含まれる。SV40DNAの複製反応を、上述抽出液、ラージT-抗原及びCAF-1存在下に行うと、複製されたDNAにH3.H4が配置された状態で反応が停止する。この複製DNA-H3.H4前駆体をテンプレートに用い、H2A.H2Bを効率的に配置しヌクレオソームの構築を促進する活性の精製を進めている。加えて、この系は、CAF-1やASF1など既知因子の同ヌクレオソーム構築反応における役割の解析にも役立つ。さらに、同ヌクレオソーム構築反応の生命システムにおける役割を考察する目的で、高等植物シロイヌナズナの、CAF-1及びASF1変異株或いはその多重変異株を単離・解析している。

DNA replication is a process of rapid distribution of DNA once it is dissociated and synthesized. This DNA replication is associated with the construction of CAF-1 and ASF-1 specific binding protein groups. We have a lot of information about replication, replication, and non-replication DNA. For example, CAF-1,ASF-1 and other components of the reaction mechanism can be used to understand the reaction mechanism. This year, the identification, refinement and analysis of necessary factors are carried out in order to construct a reaction system, the configuration of H3.H4(H3H4), and the configuration of H2A.H2B(H2A2B). S100 extract from the origin of T293 cells, Phosphocellulose production, DNA replication, and all activities other than H2A and H2B are essential for the construction of T293 cells. The replication of SV40 DNA in the presence of the extract, T-antigen and CAF-1 was stopped in the presence of H3.H4. The replication of DNA-H3.H4 precursor was carried out in order to improve the efficiency of H2A. H2B. Add to the list of known factors, CAF-1 and CAF-1. In order to investigate the biological system of higher plants, CAF-1 and ASF-1 mutants or multiple mutants of higher plants were isolated and analyzed.

项目成果

柴原慶一 他: "DNA複製期におけるヌクレオソーム構築の機構と意義"シュプリンガー・フェアラーク社. (2002)

Keiichi Shibahara 等人：“DNA 复制过程中核小体组装的机制和意义”Springer-Verlag (2002)。

Shibahara, k-i et al.: "A novel transformation suppressor, Pdcd4, inhibits AP-1 transactivation but not NF-KB or ODC transactivation"Oncogene. 20(6). 669-76 (2001)

Shibahara, k-i 等人：“一种新型转化抑制因子，Pdcd4，抑制 AP-1 反式激活，但不抑制 NF-KB 或 ODC 反式激活”癌基因。

Shibahara, k-i et al.: "FASCIATA genes for chromatin assembly factor-1 in Arabidopsis maintain the cellular organization of apical meritems"Cell. 104. 131-142 (2001)

Shibahara, k-i 等人：“拟南芥中染色质组装因子 1 的 FASCIATA 基因维持顶端优点的细胞组织”细胞。