血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導タンパク質とその受容体に関する研究

血管内皮细胞特异性凋亡诱导蛋白及其受体的研究

• 批准号: 14740466
• 负责人: 増田 信奈子
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14740466/
• 关键词: 血管内皮細胞; ヘビ毒; アポトーシス; 出血性ヘビ毒

本研究では、研究代表者が出血性ヘビ毒から見いだした新規血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導タンパク質(VAP)をもとに、生体内で血管内皮細胞のアポトーシスを制御している因子や受容体を見いだし、その構造や作用機序を明らかにすることを目的とする。本年度は、VAPcDNAのタンパク質発現系の確立及び血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導因子受容体の検索を試みた。血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導因子を特定するためには、VAPに共通するアミノ酸配列をもとに得られた血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導因子の候補タンパク質の発現系を確立し、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞を用いてアポトーシス誘導活性を評価することが必要となる。そこで、血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導因子発現系の確立を視野に入れてVAPタンパク質発現系の確立を試みた。昨年度までに大腸菌タンパク質発現系を用いてVAPの発現を試みていたが、効率的に発現誘導出来なかった。本年度は昆虫細胞発現系及びほ乳類発現系を用いてVAPのタンパク質発現条件の検討を行ったところ、昆虫細胞発現系で効率的に発現誘導する条件を決定することが出来た。現在この昆虫細胞発現系を用いてタンパク質発現させ、分離精製条件の検討を行っている。次に、血管内皮細胞特異的アポトーシス誘導因子受容体の検索を試みた。これまでの研究の結果からVAPはインテグリンなどを含む特定の膜タンパク質複合体にディスインテグソンドメインを介して結合すると考えられる。そこでVAP受容体の検索にむけて、VAPの活性阻害抗体である抗インテグリン抗体、抗CD9抗体を用いた血管内皮細胞の膜画分の免疫沈降物の解析を行ったが、受容体候補タンパク質は得られなかった。今後さらなる実験方法や条件の検討が必要である。

In this study, the authors proposed new vascular endothelial cell-specific protein (VAP) to control the expression of vascular endothelial cells in vivo, and to clarify factors, receptors, structures and mechanisms of action. This year, VAP cDNA protein expression system was established and a vascular endothelial cell-specific protein induction factor receptor model was tested. VAP is a common gene for vascular endothelial cell-specific expression factors, and VAP is a common gene for VAP. A candidate gene expression system for VAP specific expression factors is established and necessary for evaluation of VAP induction activity in umbilical vein endothelial cells. The establishment of VAP protein expression system was studied in vitro. In the past year, the development of E. coli was induced by the development of VAP. This year, the insect cell development system and the milk development system were used to determine the conditions for the development of VAP and the induction of insect cell development. Now the insect cell development system is used to study the separation and purification conditions. Second, the vascular endothelial cell-specific receptor profile test The results of this study include the following: VAP has a specific membrane complex, which can be combined with VAP. VAP receptor detection, VAP activity-inhibiting antibodies, anti-CD9 antibodies, and analysis of immune deposits from vascular endothelial cell membrane fractions were performed, and receptor candidates were obtained. In the future, it is necessary to discuss the method and conditions.