心臓線維芽細胞由来血管新生抑制因子LYPD1の作用機序の解明

血管新生は生体の恒常性維持に不可欠であり、促進系と抑制系のバランスにより制御されているが、抑制系については不明な点が多く残されている。これまでに心臓線維芽細胞が血管新生を抑制することを見出し、その責任分子として心臓において有意な高発現するLYPD1を同定し、「LYPD1は血管新生抑制活性を介して心臓における恒常的な構造およびその機能の維持に寄与する」と想定している。本研究では心臓線維芽細胞による血管新生抑制作用の生理的・病理的意義の解明に向けて、責任分子であるLYPD1の作用機序を明らかにし、機能発現制御法を探ることを目的とした。今年度はLYPD1の機能部位に対する特異抗体の作製やプルダウンアッセイによる相互作用分子の同定に向けてリコンビナントLYPD1タンパク質の大量調整法の確立を試みた。昆虫細胞を用いてリコンビナントLYPD1を調整することは出来たが、得られたタンパク質に血管新生抑制活性は見られず、昆虫細胞発現系では活性を保持したLYPD1の調整は難しいと判断した。これを踏まえ、機能部位を含むペプチドを抗原とした特異抗体の作製を検討している。また、LYPD1相互作用分子の同定に向けて、血管内皮細胞膜タンパク質調整、プルダウンアッセイについて条件検討をすすめアッセイプロトコルを作成した。LYPD1の遺伝子発現制御機構についてはGATA6がLYPD1の発現を正に制御する転写因子であることを学術誌で報告し、GATA6によるLYPD1遺伝子発現制御はGATA6の遠位調節部位への結合によると推論した。

血管新生は生体の恒常性維持に不可欠であり、促進系と抑制系のバランスにより制御されているが、抑制系については不明な点が多く残されている。これまでに心臓線維芽細胞が血管新生を抑制することを見出し、その責任分子として心臓において有意な高発現するLYPD1を同定し、「LYPD1は血管新生抑制活性を介して心臓における恒常的な構造およびその機能の維持に寄与する」と想定している。本研究では心臓線維芽細胞による血管新生抑制作用の生理的・病理的意義の解明に向けて、責任分子であるLYPD1の作用機序を明らかにし、機能発現制御法を探ることを目的とした。今年度はLYPD1の機能部位に対する特異抗体の作製やプルダウンアッセイによる相互作用分子の同定に向けてリコンビナントLYPD1タンパク質の大量調整法の確立を試みた。昆虫細胞を用いてリコンビナントLYPD1を調整することは出来たが、得られたタンパク質に血管新生抑制活性は見られず、昆虫細胞発現系では活性を保持したLYPD1の調整は難しいと判断した。これを踏まえ、機能部位を含むペプチドを抗原とした特異抗体の作製を検討している。また、LYPD1相互作用分子の同定に向けて、血管内皮細胞膜タンパク質調整、プルダウンアッセイについて条件検討をすすめアッセイプロトコルを作成した。LYPD1の遺伝子発現制御機構についてはGATA6がLYPD1の発現を正に制御する転写因子であることを学術誌で報告し、GATA6によるLYPD1遺伝子発現制御はGATA6の遠位調節部位への結合によると推論した。