RNA干渉および多重発光マクロアレイを併用したダイズ脂質生合成遺伝子の網羅的解析

RNA干扰和多重发光宏阵列综合分析大豆脂质生物合成基因

• 批准号: 14760005
• 负责人: 穴井 豊昭
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Saga University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760005/
• 关键词: ダイズ; 貯蔵脂質; 脂肪酸不飽和化酵素; RNA干渉; マクロアレイ

本年度は、昨年作成したダイズ(農林2号)未熟種子由来の完全長cDNAライブラリーから得られた、重複を省いた389クローンを選抜しマクロアレイを作成した。続いてこのマクロアレイシステムのテストを行うため、異なるステージのダイズ未熟種子(<5mm,5〜7mm,7〜9mm及び≧10mm)、葉、花、根からmRNAを抽出し、アンカーを介したRT-PCR法によりジゴキシゲニン(DIG)標識のcDNAプローブを作成し、ハイブリダイゼーションに用いた。この画像データをFAS-1000によりコンピュータ上に取り込み、画像解析ソフトImageQuantを用いて定量した結果、本方法はRIを用いた方法と同等の検出感度を持つことが明らかになった。また、発現量に変化が認められたもののうち56クローンを抽出してノーザンブロット分析により妥当性を検証したところ、5倍以上のシグナル強度の差を示したクローンについては、約85%のもので両方法での解析結果が一致した。そこで、主要な貯蔵タンパク質である7S及び11Sグロブリンが欠失した系統の解析を行った結果、リポキシゲナーゼ、オレオシン、FAD3といった脂質代謝関連遺伝子の一部について発現が有意に上昇してことが明らかとなった。また、昨年から引き続き行っているDGATおよびFAD3遺伝子のRNAi誘導個体は、それぞれ数系統のハイグロマイシン耐性個体が得れたが、稔性が低く、殆ど種子が得られておらず、解析には至っていない。これらの解析を進めるためには、今後、ダイズの形質転換法の更なる改良が必要であると考えられた。

This year, we made a complete long cDNA for immature seeds (Nonglin No. 2). The mRNA of immature seeds (<5mm,5 ~ 7mm,7 ~ 9mm and ≥ 10mm), leaves, flowers and roots was extracted and identified by RT-PCR method. This method uses the same sensitivity as the RI method. About 85% of the analysis results were consistent with each other in terms of the difference between the intensity of the sample and the intensity of the sample. The results of analysis of the main storage system, the main storage system, the main storage system, The RNAi-induced individuals of DGAT and FAD3 genes were analyzed and analyzed in the same way as the resistant individuals of the DGAT and FAD3 genes. The analysis of the future, the future, the quality of the change of law and the improvement of the necessary

项目成果

T.Anai: "Improvement of rice (Olyza sativa L.) seed oil quality through introduction of a soybean microsomal omega-3 fatty acid desaturase gene"Plant Cell Rep.. 21. 988-992 (2003)

T.Anai：“通过引入大豆微粒体 omega-3 脂肪酸去饱和酶基因改善稻米 (Olyza sativa L.) 种子油品质”Plant Cell Rep.. 21. 988-992 (2003)

T.Anai, M.Koga, H.Tanaka, T.Kinoshita, S.M.Rahman, Y.Takagi: "Improvement of rice (Oryza sativa L.) seed oil quality through introduction of a soybean microsomal omega-3 fatty acid desaturase gene"Plant Cell Rep.. (印刷中). (2003)

T.Anai、M.Koga、H.Tanaka、T.Kinoshita、S.M.Rahman、Y.Takagi：“通过引入大豆微粒体 omega-3 脂肪酸去饱和酶基因改善稻米 (Oryza sativa L.) 籽油质量”植物细胞代表..（印刷中）（2003）。

T.Anai, Y.Takagi: "Isolation and analysis of storage lipid biosynthesizing genes of soybean"Proceeding of Japan/Taiwan symposium on molecular biology of functional regulation in plant and microbe. 70-76 (2003)

T.Anai，Y.Takagi：“大豆贮藏脂质生物合成基因的分离和分析”日本/台湾植物和微生物功能调节分子生物学研讨会论文集。