バキュロウイルスによるモディファイアー分子利用機構の解析

杆状病毒修饰分子利用机制分析

• 批准号: 14760034
• 负责人: 今井 典子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760034/
• 关键词: バキュロウイルス; カイコ核多角体病ウイルス; ユビキチン; ユビキチンリガーゼ; RINGフィンガータンパク質; モディファイアー

モディファイアー結合機構は、タンパク質の分解、輸送、機能変換などを通して生体内の様々なイベントに関わっており、重要な役割を担っていることが知られている。本研究は、ウイルス感染機構の解明を目指し、モディファイアー結合機構に関わるバキュロウイルスの遺伝子を同定し、その機能がどのようにウイルス感染に関わるのかを調べることを目的として行われた。前年度までに、BmNPVのRINGフィンガータンパク質が、RINGフィンガー領域依存的なユビキチンリガーゼE3として機能しうることを明らかにした。そこで、その中の一つであり、ウイルスのDNA合成や転写制御に関連すると考えられている、IE2について更に詳細な解析を試みた。まずウェスタン解析によって、ウィルス感染細胞におけるIE2の発現を経時的に追ったところ、IE2は感染後2時間から発現され、24時間までに徐々に減少・消失することが明らかになった。そこで、プロテアソーム阻害剤MG132をウイルス感染細胞に処理し、ウェスタン解析を行ったところ、ユビキチン化を示すIE2の移動度の変化が見られた。このことから、IE2の消失はプロテアソームを介した分解によるものであると考えられた。一方、共焦点レーザー顕微鏡観察により、感染細胞の核内でIE2が形成するfoci(点状構造)が感染後12時間までに消失することが分かった。このfociの一部がウイルス複製領域(IE1局在領域)に隣接していることから、この特徴的な局在は感染に重要であると考えられた。そこで、感染細胞にMG132を処理し観察したところ、通常より拡大したfociを形成したことから、IE2はここに蓄積するものと考えられた。また、IE2のE3活性を欠失させた変異体であるRING領域変異体を、細胞にトランスフェクションした場合にも、MG132処理の際と酷似したfociの拡大が見られた。以上より、IE2のE3活性が自身の発現消長および細胞内局在を調節していることが明らかになり、これによってウイルス複製を制御することが示唆された。

The structure of the binding mechanism is composed of the decomposition, transportation and function of the substance, and the communication between the substance and the substance in the organism is carried out. This study aims at clarifying the mechanism of infection, identifying the mechanism of infection, and regulating the mechanism of infection. The previous year, BmNPV RING, RING. The relationship between DNA synthesis and DNA control is discussed in detail in this paper. IE2 appears 2 hours after infection and disappears 24 hours after infection. In this case, the detection and analysis of MG132 infected cells can be carried out in different ways, and the mobility of IE2 can be changed. This is the first time that IE2 has been deleted. A square, confocal, microscopic examination of the infected cells, the formation of IE2, foci (punctiform structures), and the disappearance of IE2 12 hours after infection. A part of this focus is copied in the field (IE 1 Bureau in the field), adjacent to it, and the characteristic bureau in the infection is important. MG132 infection is usually caused by the presence of a large number of cells. In addition, the activity of IE 2 and E3 is different. In addition, the activity of MG 132 is similar to that of FOCI. The activity of IE2 and E3 is regulated by its own development and replication.

项目成果

Noriko Imai, Noriyuki Matsuda, Keiji Tanaka, Akihiko Nakano, Shogo Matsumoto, WonKyung Kang: "Ubiquitin ligase activities of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus RING finger proteins"Journal of Virology. Vol.77, No.2. 923-930 (2003)

Noriko Imai、Noriyuki Matsuda、Keiji Tanaka、Akihiko Nakano、Shogo Matsumoto、WonKyung Kang：“家蚕核多角体病毒环指蛋白的泛素连接酶活性”病毒学杂志。