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消化管カハール細胞での自発活動発現機序に関する生理学及び分子学的研究

胃肠道Cajal细胞自发活动表达机制的生理和分子研究

基本信息

批准号：
14760192
负责人：
藤田秋一
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

以前よりsmall conductance Ca^<2+>-activated K^+ (SK) channelの選択的遮断薬であるapaminにより消化管の自発運動が影響を受けることが明らかにされていた。申請者はマウスおよびラットの消化管におけるSK channelの発現をRT-PCRにより検討した。その結果、主にSK2,SK3およびSK4が発現することを明らかにした。このうちSK2およびSK3がapamin感受性であることから、申請者はこれら2遺伝子に対する抗体を作成し消化管での発現細胞を検討した。その結果、両チャネルともに平滑筋細胞には発現せず、SK2細胞はアウエルバッハの神経叢に分布する神経細胞体に発現し、SK3はカハールの介在細胞(interstitial cells of Cajal;ICC)とよく似た形態を持つ細胞に発現することがわかった。さらに免疫電子顕微鏡を利用することにより SK3チャネルはfibroblast様細胞に発現し、その細胞は平滑筋細胞とgap junctionで結合していることを明らかにした(発表論文)。このことから消化管の自発運動調節にはfibroblast様細胞に発現する SK3チャネルが関与することが示唆された。最近、消化管に存在するICCが心臓でみられるような歩調とり細胞(ペースメーカー細胞)様の働きを行い、消化管の自発性運動においてICCが中心的な役割をすると考えられるようになってきている。今回の実験結果から申請者はこのICCに加えてfibroblast様細胞も消化管自発運動の制御に関与すると考えている。さらに申請者はこの細胞を単離しSK3の発現を免疫染色法で検討したところ、単離直後は発現が認められるものの、2時間培養すると発現がなくなることが明らかになった。さらに培養皿をプロネクチンでコートした後に培養した場合は2時間培養後もSK3の発現は保持されていた。このことから、SK3の発現には細胞外マトリックスの調節を受けていることが予想される。現在この減少の詳細な検討を行っている。

Previously, small conductivity Ca^<2+>-activated K^+ (SK) channel was selected to block apamin, which affected the spontaneous movement of digestive tract. The applicant was investigating the discovery of SK channel in the digestive tract of Matisse and Thailand through RT-PCR. The main result is SK2, SK3 and SK4. SK2 and SK3 are apamin sensitive, and the applicant is responsible for producing antibodies to the digestive tract. As a result, smooth muscle cells were found in SK2 cells, and interstitial cells of Cajal (ICC) were found in SK3 cells, and smooth muscle cells were found in SK2 cells. In this paper, we discuss how to use the electron microscope to detect the cell proliferation of SK3 cells and how to detect the cell proliferation of SK3 cells. The regulation of the spontaneous movement of the digestive tract is related to the development of fibroblast cells. Recently, the digestive tract has been in the presence of ICC, which is the center of the digestive tract. The results of this review indicate that the applicant is interested in the regulation of gastrointestinal motility by adding fibroblast cells to the ICC. In addition, the applicant was able to detect the expression of SK3 by immunostaining, and the expression of SK3 was detected by immunostaining after 2-hour culture. The growth of SK3 in the culture dish was maintained after 2 hours of incubation. The expression of SK3 is regulated by extracellular factors. Now the detailed discussion of the reduction is in progress.