組織特異的幹細胞の分化・増殖に関与する諸因子の検討と肝幹細胞移植の実験的研究

组织特异性干细胞分化、增殖相关因素的检测及肝干细胞移植的实验研究

• 批准号: 14770241
• 负责人: 足立 雅之
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770241/
• 关键词: 肝再生; 肝細胞培養法; Side population cell; アポトーシス; コラーゲンサンドウィッチ法; SP細胞

肝細胞長期培養系またはSP細胞を用いた肝細胞分化・増殖に関与する諸因子の動態についての検討通常の培養条件で、初代培養肝細胞は短期間で線維芽細胞様に形態変化し肝特異的機能を失うが、コラーゲンゲルを重層することで、いったん失った機能を再獲得できることを、肝特異的遺伝子発現量やアルブミン産生量の比較で明らかにした。臓器によらない分離方法で採取する組織幹細胞として注目されているSide population cell(SP細胞)は、骨髄・肝臓非実質細胞・脾臓のいずれから分離したものでも、分離直後は肝特異的遺伝子の発現は認められないが、初代培養肝細胞と2週間混合培養することで増殖、アルブミン・CK18・AFPといった肝特異的マーカーの発現を蛋白質のレベルで確認できるようになる。この結果から、コラーゲンゲル・サンドイッチ法を用いた初代培養肝細胞との混合培養系が、SP細胞を肝細胞に分化誘導させる環境を構築できることが示唆された。肝再生におけるアポトーシス制御遺伝子の発現の検討アポトーシス制御する因子が肝細胞分化・増殖に重要であり、肝細胞内に生じる酸化ストレスが長期間にわたる機能維持、あるいは再生過程に対して阻害的に作用することを予想している。酸化ストレスによるアポトーシス誘導過程に対して、アポトーシス促進型Bcl-2family遺伝子Baxが重要であることが確認された。さらに、この過程に介在すると思われる各種シグナル伝達系あるいは転写因子の役割を検討したところ、MAP kinase assayのひとつc-Jun N-terminal Kinase(JNK)が酸化ストレスによるアポトーシスに促進的に働き、転写因子NF-kappa Bがアポトーシス抑制的に働くことを確認した。

The dynamics of factors related to hepatocyte differentiation and proliferation in long-term culture of hepatocytes and SP cells are discussed in general culture conditions, and the morphological changes of primary cultured hepatocytes in short-term culture of SP cells and liver specific functions are lost. Comparison of liver-specific gene production and liver-specific gene production The method of isolation of tissue stem cells and liver stem cells was used to isolate and identify liver-specific stem cells. Primary cultured hepatocytes were cultured for 2 weeks.アルブミン·CK18·AFPといった肝特异的マーカーの発现を蛋白质のレベルで确认できるようになる。The results of this study were as follows: (1) Primary culture of hepatocytes,(2) establishment of mixed culture system of SP cells,(3) induction of hepatocyte differentiation,(4) establishment of environment for differentiation of SP cells,(5) establishment of culture system of SP cells,(6) establishment of culture system of SP cells,(7) establishment of culture system of SP cells,(8) establishment of culture system of SP cells,(9) establishment of culture system of SP cells,(10). The factors that control the development of hepatic regeneration are important for the differentiation and proliferation of hepatocytes, and the function maintenance of intracellular acidification for long-term regeneration and inhibition of hepatic regeneration are expected. The role of Bcl-2 family gene in the process of acidification is important. In this process, we consider that the MAP kinase assay and the N-Jun N-terminal Kinase(JNK) assay promote and inhibit the expression of various factors, such as NF-kappa B.

项目成果

Masayuki Adachi, et al.: "Lipid Peroxidation Product 4-hydroxy-nonenal Enhances Ethanol-Induced Hepatocellular Apoptosis by Affecting Both Pro-apoptotic JNK Activity and Anti-apoptotic NF-kB."Gastroenterology. 124. A715 (2003)

Masayuki Adachi 等人：“脂质过氧化产物 4-羟基壬烯醛通过影响促凋亡 JNK 活性和抗凋亡 NF-kB 来增强乙醇诱导的肝细胞凋亡。”胃肠病学。