心筋ストレス応答機構におけるヒストン脱アセチル化酵素Sirの役割

1.マウス発生過程におけるSir2αの発現マウス胎児におけるSir2αのmRNA発現量をNorhern blotにより調べたところ、胎生初期に強い発現が認められ、その後発生が進むにしたがって発現量が漸減していた。Sir2αに対する抗体を作製し、タンパク発現を調べると、Sir2αは心臓と脳に特に強く発現していた。mRNAと同様Sir2αタンパク発現量も発生の過程で減少していた。心臓におけるSir2α mRNA量を定量的RT-PCR法により定量したところ、胎生12.5日(E12.5)からE14.5の間に約60%の発現量の減少が認められたが、その後は出生27ヶ月までほぼ一定のmRNAが発現していた。心臓においてSir2αは4心腔が形成されるE12までに強く発現しており、その後急速に発現量が減少することからSir2αが心臓発生に関わっている可能性が示唆された。2.Sir2αの核移行及び核外移行シグナルの同定培養細胞においてSir2αは核に局在することが報告されている。Sir2αにはaa91-114(NLS1)とaa667-690(NLS2)の2カ所に核移行シグナル(NLS)が存在することが予想された。deletion mutantを作製して細胞内局在の変化を調べると、2つのNLSを持つクローンは核に、どちらか一方しかもたないクローンでは核と細胞質、さらに両者を持たないクローンは細胞質のみに分布していた。NLSにpoint mutationを導入した実験でも同様な成績が得られ、Sir2αには2つのNLSが存在することが明らかとなった。また、Sir2αのaa1273-1326とaa1381-1413には核外移行シグナル(NES)の存在が推定された。deletion mutantの細胞内分布の変化からもNESの存在が支持され、Sir2αは核・細胞質間を移動することが示唆された。

1.マウス発生過程におけるSir2αの発現マウス胎児におけるSir2αのmRNA発現量をNorhern blotにより調べたところ、胎生初期に強い発現が認められ、その後発生が進むにしたがって発現量が漸減していた。Sir2αに対する抗体を作製し、タンパク発現を調べると、Sir2αは心臓と脳に特に強く発現していた。mRNAと同様Sir2αタンパク発現量も発生の過程で減少していた。心臓におけるSir2α mRNA量を定量的RT-PCR法により定量したところ、胎生12.5日(E12.5)からE14.5の間に約60%の発現量の減少が認められたが、その後は出生27ヶ月までほぼ一定のmRNAが発現していた。心臓においてSir2αは4心腔が形成されるE12までに強く発現しており、その後急速に発現量が減少することからSir2αが心臓発生に関わっている可能性が示唆された。2.Sir2αの核移行及び核外移行シグナルの同定培養細胞においてSir2αは核に局在することが報告されている。Sir2αにはaa91-114(NLS1)とaa667-690(NLS2)の2カ所に核移行シグナル(NLS)が存在することが予想された。deletion mutantを作製して細胞内局在の変化を調べると、2つのNLSを持つクローンは核に、どちらか一方しかもたないクローンでは核と細胞質、さらに両者を持たないクローンは細胞質のみに分布していた。NLSにpoint mutationを導入した実験でも同様な成績が得られ、Sir2αには2つのNLSが存在することが明らかとなった。また、Sir2αのaa1273-1326とaa1381-1413には核外移行シグナル(NES)の存在が推定された。deletion mutantの細胞内分布の変化からもNESの存在が支持され、Sir2αは核・細胞質間を移動することが示唆された。