ラミンA/C遺伝子変異による拡張型心筋症発症機序の検討

Nuclear laminaの構成蛋白であるラミンA/Cの遺伝子異常は、家族性拡張型心筋症(DCM)を来す。しかしながらラミンA/C遺伝子変異がどのようにDCMを来すのかは未だ不明であり、本検討はその機序の解明を目的としている。昨年度、野生型ラミンA/C cDNAをクローニングし、目的な変異を挿入した。これらのコンストラクトは、ほ乳類発現ベクターに挿入した。今年度は、心筋細胞に野生型ラミンA/Cと変異ラミンA/Cを発現させ、まず細胞生存率に与える影響を検討した。野生型ラミンA/Cに比し、変異ラミンA/C発現細胞では生存率の低下がみられた。TUNEL染色による評価では、野生型に比し変異ラミンA/C発現細胞では有意にTUNEL陽性細胞が増加していた。また、DNA ladderingも変異ラミンA/C発現により出現しており、変異ラミンA/Cは主としてアポトーシスにより、心筋細胞死を誘導する可能性が示唆された。また、preliminaryな結果であるがfluo-3 AMを用いて細胞内Ca^<2+>を測定すると野生型に比し、変異ラミンA/C発現細胞ではCa^<2+>スパークの振幅が減少していることがわかった。これらの結果は、ラミンA/C遺伝子異常は心筋収縮を直接減弱させると共に、心筋細胞死誘導することによりDCMを来す可能性を示唆している。今後、変異ラミンA/Cの過剰発現マウスの作成に着手する予定である。

Nuclear laminaの構成蛋白であるラミンA/Cの遺伝子異常は、家族性拡張型心筋症(DCM)を来す。しかしながらラミンA/C遺伝子変異がどのようにDCMを来すのかは未だ不明であり、本検討はその機序の解明を目的としている。昨年度、野生型ラミンA/C cDNAをクローニングし、目的な変異を挿入した。これらのコンストラクトは、ほ乳類発現ベクターに挿入した。今年度は、心筋細胞に野生型ラミンA/Cと変異ラミンA/Cを発現させ、まず細胞生存率に与える影響を検討した。野生型ラミンA/Cに比し、変異ラミンA/C発現細胞では生存率の低下がみられた。TUNEL染色による評価では、野生型に比し変異ラミンA/C発現細胞では有意にTUNEL陽性細胞が増加していた。また、DNA ladderingも変異ラミンA/C発現により出現しており、変異ラミンA/Cは主としてアポトーシスにより、心筋細胞死を誘導する可能性が示唆された。また、preliminaryな結果であるがfluo-3 AMを用いて細胞内Ca^<2+>を測定すると野生型に比し、変異ラミンA/C発現細胞ではCa^<2+>スパークの振幅が減少していることがわかった。これらの結果は、ラミンA/C遺伝子異常は心筋収縮を直接減弱させると共に、心筋細胞死誘導することによりDCMを来す可能性を示唆している。今後、変異ラミンA/Cの過剰発現マウスの作成に着手する予定である。