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上皮細胞の極性形成に関与するaPKCの生理的基質の探索

寻找参与上皮细胞极性形成的aPKC生理底物

基本信息

批准号：
14780543
负责人：
足立誠
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

上皮細胞の極性形成に関与する新規因子を見つける目的で、aPKCに結合する分子を上皮培養細胞からの免疫沈降法によって同定した結果、ある種のセリン・スレオニンホスファターゼの制御サブユニットが見いだされた。これまでの解析により、この分子が細胞内においてaPKCと結合すること、またこの分子の免疫沈降物に対してin vitroでリン酸化反応を起こさせると(外来のキナーゼを反応系に加えなくても)この分子への強いリン酸の取り込みが生じること、そしてこのリン酸化が、aPKCの特異的阻害剤で顕著に阻害されることが見いだされた。これらの結果はこのホスファターゼ制御因子がaPKCと複合体を形成しており、aPKCの基質として上皮極性形成過程に関与している可能性があることを示唆している。現在、この分子が極性形成過程においてどのような機能を持ち得るのかを明らかにするために、1)上皮培養細胞でのRNAiによるノックダウン、または変異型マンストラクトの過剰発現により生じる表現形の解析、2)免疫染色法による細胞内局在の詳細な解析(既にこの分子に対する特異的抗体を作成済みである)、3)リン酸化部位の同定とリン酸化の意義の解明、4)この分子と複合体を生しているホスファターゼ触媒サブユニット自身の機能の解析、5)aPKC・制御因子・触媒サブユニットそれぞれの間の結合部位および結合制御機構の解析、などを行なっている。

The polarity formation of epithelial cells is closely related to the regulation of novel factors and the purpose of aPKC, the binding of molecules to epithelial cultured cells, and the immunity of epithelial cells. Sedimentation methodによって同定したRESULTS、あるkindのセリン・スレオいだされたこれまでのanalyticalにより、このmoleculeがintracellularにおいてaPKCとbindingすること、またこのmoleculeのimmune sedimentationに対してin vitroでリンacidification reaction こさせると(外のキナーゼをreaction system に加えなくても)このmolecule へのstrong いリンacidのTake り込みが生じること, そしてこのリン acidified が, and aPKC's specific blocking agent されることが见いだされた. aP KC's matrix is related to the formation process of epithelial polarity and the possibility of the formation of epithelial polarity. Now, the polarity formation process of the molecule is as follows:を明らかにするために、1) Epithelial cultured cells でのRNAiによるノックダウン、または変Special-shaped Malinストラクトのpassing剰発现により生じる Manifestation analysis, 2) Detailed analysis of intracellular localization by immunostaining method. Different antibodies are made (みである), 3) the same meaning of the リン acidification site and the とリン acidification part Meaning of explanation, 4) molecule and complex of molecule and complex of raw materials Analysis of the functions of the ニット itself, analysis of 5) aPKC・control factor・catalyst サブユニットそれぞれの间のjoining part およびcombination control mechanism, and analysis of the などを行なっている.