DNA修復過程におけるクロマチン構造の影響とその構造変化制御機構の解明

阐明染色质结构对DNA修复过程的影响以及控制其结构变化的机制

• 批准号: 02J20162
• 负责人: 安田 武嗣
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20162/
• 关键词: XPC; UV-DDB; p300; CBP; ヌクレオソーム; ヒストン; アセチル化; DDB2; クロマチン; ヌクレオチド除去修復; 紫外線損傷; DDB

ヌクレオチド除去修復(NER)は、紫外線や化学物質などによるDNA損傷の修復に関わっている。ゲノム全体を対象としたヒトのNERにおいて、XPC複合体とUV-DDBは損傷部位に対して特異的に結合する損傷認識因子である。XPC複合体のDNA結合活性は、損傷部位がヌクレオソーム構造をとることによって強く阻害された。一方、UV-DDBはヌクレオソーム構造をとる損傷DNAに対しても効率良く結合したことから、UV-DDBがヌクレオソーム構造をとったDNAの損傷を最初に認識できる因子であることが示唆された。UV-DDBはヒストンアセチル化酵素であるp300およびCBPと細胞抽出液中で共免疫沈降されることが報告されており、UV-DDBによってヒストンアセチル化酵素が損傷部位に呼び込まれることによりヒストンのアセチル化が誘導されるというモデルが考えられていた。そこで、この仮説が正しいのかどうかを明らかにするために、p300およびCBPを精製し、精製タンパク質を用いたin vitroの解析を行った。精製タンパク質を用いた共免疫沈降実験を行った結果、UV-DDBとCBPは物理的に相互作用することが明らかになった。次に、ヌクレオソーム構造をとったDNAを基質として用いたCBPによるin vitroのヒストンアセチル化アッセイにおいて、UV-DDBの添加による影響を解析した。その結果、紫外線照射した基質にUV-DDBを添加しても、CBPによるピストンのアセチル化の上昇は見られず、これまで考えられていた仮説を支持する結果にはならなかった。一方、このアッセイによって、非ヒストンタンパク質であるUV-DDBのDDB2サブユニットがCBPやp300によってアセチル化されるという興味深い結果が得られた。また、DDB2のアセチル化はin vivoでも確認することができた。DDB2のアセチル化の生物学的意義について、解析を行っている。

ヌ ク レ オ チ ド remove repair (NER) は chemicals, ultraviolet や な ど に よ る の DNA damage repair に masato わ っ て い る. ゲ ノ ム all を like と seaborne し た ヒ ト の NER に お い て, XPC complex と UV - DDB は injury に し seaborne て specific に combining す る damage know factor で あ る. The <s:1> DNA binding activity of the XPC complex された, the site of damage がヌ レ <s:1> ソ ソ ム ム structure をとる とによって とによって とによって strong く inhibition された. Side, UV - DDB は ヌ ク レ オ ソ ー ム tectonic を と る damage DNA に し seaborne て も sharper rate good く combining し た こ と か ら, UV - DDB が ヌ ク レ オ ソ ー ム tectonic を と っ た の DNA damage を initially に know で き る factor で あ る こ と が in stopping さ れ た. UV - DDB は ヒ ス ト ン ア セ チ ル phenoloxidase で あ る p300 お よ び CBP と cellular extract で were immune to sink さ れ る こ と が report さ れ て お り, UV - DDB に よ っ て ヒ ス ト ン ア セ チ ル phenoloxidase が injury に shout び 込 ま れ る こ と に よ り ヒ ス ト ン の ア セ チ ル change induced さ が れ る と い う モ デ ル が exam Youdaoplaceholder0 えられて た. そ こ で, こ の 仮 said が is し い の か ど う か を Ming ら か に す る た め に, p300 お よ び CBP を refined し, refined タ ン パ ク qualitative を with い た in vitro analytical を の line っ た. Refined タ ン パ ク qualitative を with い た were immune to sink be 験 を line っ た result, UV - DDB と CBP は physical に interaction す る こ と が Ming ら か に な っ た. に, ヌ ク レ オ ソ ー ム tectonic を と っ た DNA を matrix と し て in い た CBP に よ る in vitro の ヒ ス ト ン ア セ チ ル change ア ッ セ イ に お い て, UV - DDB の add に よ る effect を resolution し た. そ の results, ultraviolet irradiation し に た matrix UV - DDB を add し て も, CBP に よ る ピ ス ト ン の ア セ チ ル change rise の は see ら れ ず, こ れ ま で exam え ら れ て い た 仮 says を support す る results に は な ら な か っ た. One party, こ の ア ッ セ イ に よ っ て, non ヒ ス ト ン タ ン パ ク qualitative で あ る UV - DDB の DDB2 サ ブ ユ ニ ッ ト が CBP や p300 に よ っ て ア セ チ ル change さ れ る と い う tumblers deep い results ら が れ た. Youdaoplaceholder0, DDB2 アセチ アセチ アセチ, アセチ in vivoで で confirm する する とがで とがで た た. DDB2 <s:1> アセチ the meaning of <s:1> biological analysis に アセチ て て て, analysis を lines って る る る.

项目成果

Nucleosome structure of undamaged DNA regions suppresses the non-specific DNA binding of the XPC complex

未受损 DNA 区域的核小体结构抑制 XPC 复合物的非特异性 DNA 结合

• 发表时间: 2005
• 期刊: DNA Repair 4・3
• 作者: Takeshi Yasuda;Kaoru Sugasawa;Yuichio Shimizu;Shigenori Iwai;Tadahiro Shiomi;Fumio Hanaoka
• 通讯作者: Fumio Hanaoka