腎臓と神経の発生及び再生に関与する遺伝子の探索及びその機能の解明

寻找参与肾脏和神经发育和再生的基因并阐明其功能

• 批准号: 03J00642
• 负责人: 榎本 篤
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J00642/
• 关键词: Akt; Ret; GDNF; RNA干渉法; 細胞骨格; アクチン; Girdin; 細胞運動; RET; RNA干渉

本研究の目的は腎臓および神経系の発生に重要な役割を果たしているRETチロシンキナーゼ型受容体とそのリガンドであるGDNF(glial cell-derived neurotrophic factor)のシグナル伝達系の機能をより詳細に解明することである。GDNF-RETシグナル伝達系の下流では様々なシグナル分子が活性化され、細胞の分化・生存・増殖・運動に関わっていることが明らかにされている。昨年度まではGDNF-RETシグナル伝達系の下流で活性化されるセリン・スレオニンキナーゼであるAkt1の機能をさらに解明するために、Akt1の新規結合タンパク質(Girdin)を酵母two-hybrid法を用いて同定した。これまでの実験により、Girdinはアクチン骨格と共局在する分子であり、ストレスファイバーやラメリポディアといったアクチン構造の形成に必須である分子であることを明らかとした。またGirdinはAktによってリン酸化されると移動する細胞の先端部に局在を変化させることが明らかとなった(Enomoto A, et al. : Developmental Cell(2005)9:389-402)。本年度は神経系あるいは個体におけるGirdinの機能を明らかにするために以下の実験を行った。(1)RET-GDNFシグナル伝達系におけるGirdinの機能を解析するために、RET受容体を内因性に発現しているTGW神経芽細胞腫の細胞株を用いてGirdinのsiRNAによるノックダウンの影響を検討した。TGW細胞ではGDNFに反応して神経突起の伸長が観察されるが、Girdinをノックダウンするとその突起伸長が阻害された。同様の実験をPC12D細胞およびラット海馬の初代培養神経細胞で行った。(2)Girdinのノックアウトマウスを作製するためにターゲティングベクターを作製した。現在、ターゲティングベクターにより組換え済みのES細胞を作製している。(3)Girdinの機能をさらに包括的に検討するために、Girdinのホモログ遺伝子であるDapleについて細胞生物学的機能の解析を進めている。これまでにDapleの全長cDNAのクローニングを終了し、Dapleに対するポリクローナル抗体を作製した。

The purpose of this study is to understand the importance of kidney function and the vitality of the spirit system. RE T-type receptor GDNF(glial Cell-derived neurotrophic factor)のシグナル伝达式の Function and detailed explanation of the function. GDNF-RET is a downstream molecule of the GDNF-RET system and is activated. , cell differentiation, survival, proliferation, and movement. Yesterday's annual GDNF-RET system's downstream activation function of Akt1さらに明するために、Akt1's new rules combined with タンパク性(Girdin)をyeast two-hybrid method and いて同定した.これまでの実験により, Girdin はアクチンbone pattern と合bureau in するmolecule であり, ストレスファイバーやラメリポディアといったアクチンstructureのformationに必であるmolecule であることを明らかとした. Enomoto A, et al.: Developmental Cell(2005)9:389-402). This year's は神経组あるいは Individual におけるGirdin の Function を明らかにするために The following の実験を行った. (1) RET-GDNF function analysis, RET receptor endogenous analysis Now we are using the TGW Shenjiang blastoma cell line and using the Girdin siRNA to control the effects of TGW. TGW cells are resistant to GDNF and are resistant to the elongation of the nerve cells. The same as the original culture of PC12D cells and hippocampal cells. (2)Girdin's のノックアウトマウスを出账秒到 make the するためにターゲティングベクターを make the した. Now, the ターゲティングベクターにより group replaces the ES cell え済みのES cell している. (3) Girdin's functional functions include Girdin's Girdin's Girdin and Girdin'sモログ伝子であるDapleについてANALYSIS OF THE FUNCTION OF CELL BIOLOGYを入めている.これまでにDaple full-length cDNAのクローニングをEndし, Dapleに対するポリクローナルantibodies した.

项目成果

Akt/PKB regulates actin organization and cell motility via girdin/APE

• DOI: 10.1016/j.devcel.2005.08.001
• 发表时间: 2005-09-01
• 期刊: DEVELOPMENTAL CELL
• 影响因子: 11.8
• 作者: Enomoto, A;Murakami, H;Takahashi, M
• 通讯作者: Takahashi, M