間葉系幹細胞/血管周囲線維芽細胞の未分化性誘導法の開発と線維化疾患への応用

间充质干细胞/血管周围成纤维细胞未分化诱导方法的开发及其在纤维化疾病中的应用

• 批准号: 22K18390
• 负责人: 榎本 篤
• 金额: $ 16.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K18390/
• 关键词: 線維芽細胞; 間葉系幹細胞; がん; 線維化疾患; 膵癌; 血管周囲線維芽細胞; Meflin

研究代表者はこれまでに、間葉系幹細胞（mesenchymal stem cell: MSC）あるいはMSCとほぼ同等の分化能を有するとされる血管周囲線維芽細胞（perivascular fibroblast: PVF）の特異的なマーカーとしてMeflin分子を同定した。本研究の目的は、MSC/PVFの未分化性を誘導する新規手法の開発をすすめ（目的1）、線維化疾患モデルマウスを用いてその意義と分子メカニズムを検証すること（目的2）である。本年度は下記の実験を行い、下記の結果を得た。1）ゲノム編集の手法を用いてMeflinのC末端にHiBiTペプチドタグをノックインしたMSC細胞株を作成した。本細胞の培養上清中に分泌されたMeflin-HiBiTが、NanoLucルシフェラーゼ断片（LgBiT）の添加による化学発光で検出可能であることを確認した。市販のエピジェネティクス関連化合物と幹細胞自己複製・初期化関連の化合物のライブラリーを購入し（それぞれ438種および259種のコンパウンドを含有）、上記細胞株を用いてスクリーニングを実施した。その結果、ある特定の比率でNanoLucの発光活性を上昇させる化合物として6種類を同定した。2) 研究目的2で使用予定の線維化疾患モデルマウスのひとつとして、炎症性腸疾患モデルの確立を目指した。デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘導性腸炎モデルの作成を安定して実施するための予備的実験を複数回行った。また共同研究者からIL-10欠損マウスの供与を受け、これをMeflin欠損マウスと掛け合わせる作業を終えた。

首席研究者先前已将MEFLIN分子确定为间充质干细胞（MSC）或血管周围成纤维细胞（PVF）的特定标记，据说它们具有与MSC大致相当的差异能力。这项研究的目的是开发一种新的方法来诱导MSC/PVF（目标1）的未分化，并使用纤维化疾病模型小鼠验证其意义和分子机制（目标2）。今年，进行了以下实验，并获得了以下结果。 1）使用基因组编辑技术，创建了MSC细胞系，其中将Hibit肽标签撞到Meflin的C端。有人证实，可以通过添加纳米荧光素荧光素酶片段（LGBIT）引起的化学发光来检测到细胞培养上清液中的分泌的Meflin-hibit。购买了与商业表观遗传学相关的化合物以及干细胞自动塑料和重编程化合物的库（分别包含438和259种化合物），并使用上述细胞系进行了筛选。结果，确定了六种类型的化合物，可在一定比率下增加纳米核的发光活性。 2）我们旨在建立炎症性肠病模型，作为计划在研究目标2中使用的纤维化疾病模型之一。进行了多个初步实验，以稳定地进行硫酸葡萄糖钠（DSS）诱导的肠炎的模型。此外，合作者提供了IL-10缺陷小鼠，并且完成了将它们与Meflin缺陷小鼠相比的工作。

项目成果

The usefulness of meflin expression in cancer-associated fibroblasts as a predictive marker for immune checkpoint inhibitor in clear cell renal cell carcinoma

癌症相关成纤维细胞中 meflin 表达作为透明细胞肾细胞癌免疫检查点抑制剂的预测标记的有用性

• 发表时间: 2023
• 作者: Takayuki Owaki;Yuki Miyai;Yushi Naito;Tomoyasu Sano;Atsushi Enomoto
• 通讯作者: Atsushi Enomoto

BMP3b Is a Novel Antifibrotic Molecule Regulated by Meflin in Lung Fibroblasts

BMP3b 是肺成纤维细胞中受 Meflin 调节的新型抗纤维化分子

• DOI: 10.1165/rcmb.2021-0484oc
• 发表时间: 2022
• 期刊: American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology
• 影响因子: 6.4
• 作者: Suzuki Atsushi;Sakamoto Koji;Nakahara Yoshio;Enomoto Atsushi;Hino Jun;Ando Akira;Inoue Masahide;Shiraki Yukihiro;Omote Norihito;Kusaka Masahiro;Fukihara Jun;Hashimoto Naozumi
• 通讯作者: Hashimoto Naozumi

Pharmacologic conversion of cancer-associated fibroblasts from a protumor phenotype to an antitumor phenotype improves the sensitivity of pancreatic cancer to chemotherapeutics

• DOI: 10.1038/s41388-022-02288-9
• 发表时间: 2022-04-13
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Iida, Tadashi;Mizutani, Yasuyuki;Enomoto, Atsushi
• 通讯作者: Enomoto, Atsushi

Girdin Promotes Tumorigenesis and Chemoresistance in Lung Adenocarcinoma by Interacting with PKM2.

Girdin 通过与 PKM2 相互作用促进肺腺癌的肿瘤发生和化疗耐药

• DOI: 10.3390/cancers14225688
• 发表时间: 2022-11-19
• 期刊: CANCERS
• 影响因子: 5.2
• 作者: Cao, Fuyang;Yang, Desong;Tang, Feiyu;Lu, Can;He, Xiang;Chen, Songming;Yang, Zhanghuan;Gong, Siyuan;Sun, Lunquan;Enomoto, Atsushi;Takahashi, Masahide;Weng, Liang
• 通讯作者: Weng, Liang

骨肉腫におけるMeflin陽性細胞を標的とした抗体薬物複合体の研究開発

针对骨肉瘤中 Meflin 阳性细胞的抗体药物偶联物的研究和开发

• 发表时间: 2023
• 作者: 久保田晋平;長谷部理絵;村上薫;田中勇希;村上正晃;久保田晋平;江﨑寛季
• 通讯作者: 江﨑寛季