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扁平上皮癌細胞の薬剤耐性と初期転写調節因子

鳞状细胞癌细胞的耐药性和早期转录调节因子

基本信息

批准号：
03J01807
负责人：
岡村裕彦
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J01807/
关键词：
扁平上皮癌アポトーシス転写調節因子 MDR1 NF-Y 扁平上皮癌細胞薬剤耐性

项目摘要

抗癌剤に対する感受性の違いにより二種類のヒト口腔扁平上皮癌細胞(SCCTF, SCCKN)が樹立された。SCCTF細胞はブレオマイシンやビンクリスチン(VCR)を含む多くの抗癌剤に対し耐性を示すが,SCCKN細胞は抗癌剤に対し感受性が高い。本研究では,これらの薬剤感受性の異なる口腔扁平上皮癌細胞を用いてmultidrug resistance-1 (MDR-1)遺伝子の発現およびその転写調節について検討した。VCRはMDR1蛋白を介して細胞外へ排出される薬剤であり,MDR1蛋白阻害剤で前処理することによりVCRによるアポトーシス誘導が強まることから,アポトーシスとMDR1遺伝子の関連が示唆された。両細胞におけるMDR1 mRNAの発現をRT-PCR法により調べ,その発現に関わるプロモーター領域および転写調節因子についてゲルシフトアッセイ法,クロマチン免疫沈降法,ルシフェラーゼアッセイ法を用いて比較検討した。SCCTF細胞はSCCKN細胞に比べMDR1 mRNAを高発現すること,投与したHoechst 33342を効率よく細胞外へ排出することが分かった。このことはSCCTF細胞のMDR1蛋白の薬剤排出能が高いことを示唆している。またSCCTF細胞ではMDR1プロモーター領域のCCAAT配列に対する転写調節因子NF-Yの結合能が高かった。CCAAT領域を含むルシフェラーゼコンストラクトを導入するとSCCTF細胞ではSCCKN細胞に対し10倍以上転写活性が上昇した。この配列を欠失,あるいは変異させたコンストラクトを導入した場合では転写活性の上昇は認められなかった。SCCTF細胞ではNF-YのサブユニットであるNF-YAが高発現していることが分かった。以上の結果より,SCCTF細胞におけるMDR1発現には転写調節因子NF-YとそのDNA結合領域が重要であることが分かった。

Anti-cancer susceptibility to two types of oral squamous cell carcinoma cells (SCCTF, SCCKN) has been established. SCCTF cell system (VCR) The resistance to anti-cancer agents is high, and the sensitivity of SCCKN cells to anti-cancer agents is high. In this study, the multidrug resistance-1 of oral squamous epithelial cancer cells was used in the study. (MDR-1) 缝子の発appears およびその転WRits and adjusts について検検柗た. VCR and MDR1 protein are introduced and discharged from the extracellular space.りVCR によるアポトーシスinducing がstrong まることから, アポトーシスとMDR1 伝子のrelated connection が说唆された.両cellにおけるMDR1 The RT-PCR method of mRNA is used to adjust the regulation, and the regulation factor is written in the field of mRNA.ついてゲルシフトアッセイ method, クロマチン immunosedimentation method, ルシフェラーゼアッセイ method を Use いて to compare 検曰した. The SCCTF cells and the SCCKN cells are higher than the MDR1 mRNA, and the administration of Hoechst 33342 is efficient and extracellular. The MDR1 protein in SCCTF cells can be excreted with high efficiency. The CCAAT alignment of SCCTF cells in the MDR1 domain is high and the binding energy of the regulatory factor NF-Y is high. In the field of CCAAT, SCCTF cells containing SCCTF cells and SCCKN cells have been introduced to increase writing activity by more than 10 times.この配arrayを不了, あるいは変different させたコンストラクトを Import したoccasion では転WRITE ACTIVITY のRISEN はcognize められなかった. SCCTF cell NF-YのサブユニットであるNF-YAが高発成していることが分かった. The above results show that SCCTF cells are very important in the DNA binding domain of MDR1, which is a regulatory factor NF-Y.