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骨芽細胞の分化におけるRNA Helicase A-Osterix相互作用の役割

RNA 解旋酶 A-Osterix 相互作用在成骨细胞分化中的作用

基本信息

批准号：
20791340
负责人：
岡村裕彦
金额：
$ 2.58万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20791340/
关键词：
Osterix RNA Helicase A 骨芽細胞相互作用

项目摘要

Osterixは骨芽細胞の分化に必須の転写調節因子であり、骨形成に必要な多数の蛋白質の発現を調節している。質量分析法にて同定したOsterix結合因子RNA Helicase A(RHA)が骨芽細胞とOsterixの機能に果たす役割について調べた。マウス骨芽細胞MC3T3-E1においてRNAi法を用いてRHAの発現を抑制し、細胞から蛋白質とmRNAを回収し、ウエスタンブロット法とリアルタイムPCR法を用いてALPやオステオカルシン等の骨分化マーカーの発現を調べた。また、タイプIコラーゲンプロモーターを含むルシフェラーゼベクターを作製し、ルシフェラーゼアッセイを行った。1. Osterix, RHAとも培養日数に伴い発現が上昇し、10日でピークを迎えた後減少した。2. OsterixはRHAのC末に存在するRNA結合ドメイン部に結合する。3. RHAの発現抑制に伴い骨分化マーカーの発現低下が認められた。4. RHAの発現抑制に伴いタイプIコラーゲンプロモーターに関する転写活性が低下した。以上の結果より、RHAはOsterixとの相互作用を介して骨分化マーカーの発現を制御することにより、骨芽細胞の分化を促進する働きを持つことが示唆された。

Osterix は bone bud cells のに must の planning write adjustment factor であり, bone formation にな most の necessary protein の発を adjust now している. Quality analysis にて with fixed した Osterix combination factor RNA Helicase A bud cells (RHA) が bone と Osterix の function に fruit たす "cut について adjustable べた. マウス bone bud cells MC3T3 - E1 においてを RNAi method with いて RHA の発を inhibit し now, cell から protein と mRNA を back 収し, ウエスタンブロット method とリアルタイをム PCR method with いて ALP やオステオカルシンの bone differentiation such as マーカーの発 now を adjustable べた. また, タイプ I コラーゲンプロモーターを containing むルシフェラーゼベクターを as し, ルシフェラーゼアッセイを line った. 1. Osterix, RHAとと the number of days of culture に accompanied by と showed an increase in が, followed by a decrease in <s:1> た after 10 days of でピえた and を. 2. At the end of the に of Osterix <s:1> RHA <s:1> C, there is するRNA binding ドメ <s:1> <s:1> に binding する. 3. Inhibition of RHA occurrence に accompanied by に bone differentiation occurrence にカ occurrence low が recognition められた. 4. The RHA の発 inhibit に now with いタイプ I コラーゲンプロモーターに masato する planning write low active がした. の above results より, RHA は Osterix とのを interface interaction between して bone differentiation マーカーの発 now を suppression することにより, bone bud cells のを promote する働きを hold つことが in stopping された.