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DNAコンジュゲートによる多機能集積型遺伝子医薬の開発

利用DNA缀合物开发多功能整合基因医学

基本信息

批准号：
03J01862
负责人：
久保貴紀
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

特定の遺伝子をターゲットとして遺伝子レベルで病気の治療を行う遺伝子医薬は、現在治療法のない難病の治療に適用できる優れた治療法として多くの研究者が注目している。本研究では、機能性ペプチド、糖鎖、ホルモン、酵素などあらゆる生体内機能性分子を1つのオリゴヌクレオチドに集積した"多機能集積型遺伝子医薬"の構築およびその生化学的特性を評価し、これを遺伝子医薬として応用することを目的としている。コンジュゲートDNAは、本研究で開発した固相フラグメント縮合法(SPFC)を用い合成し、簡便かつ高収率で目的のコンジュゲートDNAの合成に成功している。合成したコンジュゲートDNAは、アンチセンス配列をもつオリゴヌクレオチドと核局在化シグナル(NLS)や核外移行シグナル(NES)などのシグナルペプチドや人工デザインした両親媒性ペプチドなどを結合させている。合成したコンジュゲートDNAの生化学的特性を評価した結果、相補鎖DNAおよびRNAとの親和性の向上、ヌクレアーゼ耐性の向上などが観察された。また、合成したコンジュゲートDNAを相補的なRNAとの間の2本鎖ハイブリッドは、RNaseHによる分解反応のよい基質となることが明らかになった。さらに、コンジュゲートDNAは非常に優れた細胞導入性を示し、かつ、シグナルペプチドをコンジュゲートすることにより、細胞核や細胞質への細胞内局在化を巧みにコントロールすることが可能となった。コンジュゲートDNAのアンチセンス活性を白血病ガン細胞において活発に活動しているテロメラーゼやチロシンキナーゼを阻害することにより評価した。その結果、コンジュゲートDNAは従来のアンチセンスDNAよりも数十倍から数百倍高いアンチセンス活性を示し、かつ、細胞内での局在化をコントロールすることにより、アンチセンス活性もコントロールすることに成功した。これらの結果は、これまでの遺伝子医薬では解決が困難であった問題点を、コンジュゲートDNAを用いることにより解決することができ、より高い次元の遺伝子医薬を構築できることを示唆している。

The specific gene must be transmitted to the patient, and the treatment of the disease must be carried out. The current treatment method and the treatment of the difficult disease must be applied to the patient. The treatment method must be optimized. Many researchers have paid attention to it. The purpose of this study is to evaluate the construction and biochemical properties of multifunctional integrating-type genetic drugs by integrating functional molecules in vivo, including functional molecules, sugar locks, enzymes and enzymes. In this study, we have developed a new method for synthesizing DNA by solid-phase fluorescence condensation (SPFC), which is simple, efficient and successful. The synthetic DNA sequence can be selected from the group consisting of: DNA sequence, DNA sequence, The results of biochemical evaluation of synthetic DNA, the affinity of complementary DNA and RNA, and the tolerance of DNA to RNA were investigated. The DNA sequence is complementary to the RNA sequence. The RNA sequence is complementary to the RNA sequence. In addition, the DNA is very suitable for cell transmissibility, cell nuclear and cytoplasmic transformation, and cell transmissibility. The activity of leukemia cells was evaluated by the DNA test. As a result, the enzyme activity of DNA was tens of times higher than that of DNA, and the enzyme activity of DNA was hundreds of times higher. The results of this research are as follows: 1. To solve the difficult problem, to solve the problem, to use DNA, to construct the high-dimensional genetic medicine, to solve the problem, to solve the problem, to solve the problem,