リーダーレスタンパク質の小胞体内へのタンパク質輸送機構の解析

无前导蛋白转运至内质网的机制分析

• 批准号: 21K05502
• 负责人: 細見 昭
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05502/
• 关键词: シグナルペプチド; 小胞体; 分泌; N型糖鎖; SOD1; Tau

本研究課題の目的は、真核モデル生物である出芽酵母におけるシグナルペプチドに依存しない小胞体内へのタンパク質輸送機構の解明である。これまでの知見から、シグナルペプチド非依存的輸送において、輸送されるタンパク質中に存在するシステイン残基が一定の役割を果たしていることが明らかになった。具体的には、シグナルペプチド削除型CPY*（CPY*dN28）のシステインを11個全てセリンに置換したところ変異体の輸送能が下がることが明らかになった。特定のシステインが輸送に寄与するか否かを明らかにすべく、この変異体のセリンを一つずつシステインに戻した11個の変異体を作製し解析を行ったところ、特定のシステインが輸送に寄与しているわけではないことが明らかになった。また、出芽酵母にヒトSOD1を発現させて解析を行った。前年度の実験の結果、STE24遺伝子とHRD1遺伝子の二重破壊株でヒトSOD1が小胞体内に輸送されるという結果が得られていた。そこで、小胞体内へ輸送されたヒトSOD1が最終的に細胞外へ分泌されるのか解析したところ、分泌されることが明らかになった。加えて、分泌されたヒトSOD1が変性したSOD1を認識する抗体で検出することができた。これらの結果から、本来細胞質に存在するヒトSOD1の一部が分泌される過程で変性する可能性が示唆された。さらに、アルツハイマー関連タンパク質であるTauの輸送解析も行った。実験の結果、STE24遺伝子 HRD1遺伝子二重破壊株特異的に断片化したTauが検出された。本二重破壊株に特異的であるため断片化Tauが小胞体内へ輸送されている可能性が考えられる。

The purpose of this research topic の は, eukaryotic モ デ ル biological で あ る budding yeast に お け る シ グ ナ ル ペ プ チ ド に dependent し な い vesicular body へ の タ ン パ ク mass transportation agency の interpret で あ る. こ れ ま で の knowledge か ら, シ グ ナ ル ペ プ チ ド not dependent of conveying に お い て, conveying さ れ る タ ン パ ク に exist in mass す る シ ス テ イ ン residues が must cut を の service fruit た し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. Specific に は, シ グ ナ ル ペ プ チ ド pruned type CPY * (CPY * dN28) の シ ス テ イ ン を 11 full て セ リ ン に replacement し た と こ ろ - variants can の conveying が が る こ と が Ming ら か に な っ た. Specific の シ ス テ イ ン が conveying に send す る か no か を Ming ら か に す べ く, こ の - variant の セ リ ン を a つ ず つ シ ス テ イ ン に 戻 し た 11 の - variant を cropping し parsing line を っ た と こ ろ, specific の シ ス テ イ ン が conveying に send し て い る わ け で は な い こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0, germinating yeast にヒトSOD1を occurrence させて analysis を row った. Before the annual の be 験 の results, STE24 but 伝 と HRD1 heritage 伝 son の double broken 壊 strains で ヒ ト SOD1 が vesicular body に conveying さ れ る と い う results ら が れ て い た. そ こ で, small cell in the body へ conveying さ れ た ヒ ト SOD1 が final に secretion of extracellular へ さ れ る の か parsing し た と こ ろ, secrete さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. Add え て, secrete さ れ た ヒ ト SOD1 が - sex し た SOD1 を know す る antibody で 検 out す る こ と が で き た. こ れ ら の results か ら, originally the cytoplasm に す る ヒ ト SOD1 の a が secretion さ れ る process で す - sex が る possibility in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0, ア タ ハ ハ ハ った さらに is related to タ タ パ パ である <s:1> mass であるTau <s:1> transport analysis さらに line った. The experimental results showed that the specific に fragmentation, <s:1> たTauが検 of the double-broken 壊 strain of STE24 伝 seed HRD1 伝 seed was derived from された. This double broken 壊 strains に specific で あ る た め fragment the Tau が vesicular body へ conveying さ れ て い る possibility が exam え ら れ る.

项目成果

split-GFPを用いた小胞体内腔へのタンパク質輸送検出方法の構築

使用 split-GFP 检测蛋白质转运至内质网腔的方法的构建

• 发表时间: 2021
• 作者: 西川卓弥;細見 昭
• 通讯作者: 細見 昭

Tauタンパク質の輸送機構の解明

阐明 Tau 蛋白的转运机制

• 发表时间: 2022
• 作者: LE THI HOANG UYEN; 細見 昭
• 通讯作者: 細見 昭

シグナルペプチド非依存的な小胞体内へのタンパク質輸送におけるシステインの役割

半胱氨酸在不依赖信号肽的蛋白质转运至内质网中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 眞嶋裕也;細見昭
• 通讯作者: 細見昭

タンパク質のシグナルペプチド非依存的な輸送における細胞質シャペロンの機能解明

细胞质伴侣在信号肽独立蛋白转运中的功能阐明

• 发表时间: 2021
• 作者: 松下 嵩;細見 昭
• 通讯作者: 細見 昭

シグナルペプチド非依存的な小胞体内腔へのタンパク質輸送を阻害する化合物の検証

抑制信号肽独立蛋白质转运至内质网腔的化合物的验证

• 发表时间: 2022
• 作者: 西川卓弥;細見昭
• 通讯作者: 細見昭