照射精子受精卵におけるS期チェックポイントにかかわるp53機能ドメインの解析

辐照精子受精卵S期检查点涉及的p53功能域分析

• 批准号: 03J05407
• 负责人: 豊島 めぐみ
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J05407/
• 关键词: X線; マウス; 受精卵; S期チェックポイント; p53; マウス受精卵

我々は,マウス初期胚の放射線応答を解析し,p53依存性S期チェックポイントを発見している.今回は,精製したp53タンパクを微少注入する方法を用い,更なるp53の機能ドメインの解析を行った.放射線応答では,損傷感知キナーゼとしてATM,ATRが知られており,p53はこれらによりリン酸化されることで活性化される.ATM,ATRを共に活性阻害するcaffeineと,ATM阻害剤であるwortmanninを用いてS期チェックポイントへの影響を調べた.照射精子受精卵でのDNA合成抑制は双方のいずれの投与でも解除された.これよりS期チェックポイントにはATMが関与していることが示唆された.次に,p53タンパクのリン酸化部位に変異を導入したタンパクを照射精子受精卵に微少注入したがS期チェックポイントの阻害はみられず,DNA合成抑制を示した.このことより,S期チェックポイントにはATMによるp53タンパクのリン酸化は大きな役割を果たしていないかもしれない.p53は転写活性化因子として知られている.p53の転写活性化能がS期チェックポイントに必要かどうか調べた.転写活性化領域に変異の入ったp53タンパクをp53ノックアウト受精卵に微少注入したところ,DNA合成抑制が見られた.また,転写阻害剤であるα-amanitinを投与してもDNA合成には影響がなかった.これらは,S期チェックポイントにはp53の転写活性化は必要でないことを示している.一方,p53タンパクの配列特異的DNA結合領域に変異の入ったp53タンパクをp53ノックアウト照射精子受精卵に微少注入したところ,DNA合成抑制はみられなくなった.また,p53野生型を用いてドミナントネガティブ効果を試みたところDNA合成抑制が阻害された.以上より,p53のDNA結合が転写とは異なる機構を介してS期チェックポイントに関与していることが明らかとなった.しかし,ATMによるp53のリン酸化は必要としないことから,ATMがターゲットとする第三の未知のタンパクとp53が何らかの働きでS期チェックポイントに関与していることが示唆される.

The analysis of radiation response in early embryo of p53-dependent S-phase is carried out in this paper. Now, the method of refining p53 is used, and the function of p53 is analyzed. Radiation response, damage perception, ATM,ATR detection,p53 detection, acidification, activation.ATM,ATR are active inhibitors of caffeine,ATM inhibitors of wortmannin, and modulation of the effects. Irradiation of sperm fertilized eggs inhibits DNA synthesis in both sexes. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. In addition,p53 was introduced into the acidified site of the irradiated sperm and fertilized eggs, and DNA synthesis was inhibited. p53 is the activation factor of the S phase. p53 is the activation energy of the S phase. DNA synthesis inhibition was observed in the field of DNA activation by injecting a small amount of DNA into the fertilized egg. The effect of α-amanitin on DNA synthesis was also studied. It is necessary to activate p53 in the S phase. On the other hand,p53 gene expression in the DNA binding domain of p53 gene expression is different from that of p53 gene expression in the DNA binding domain. p53 wild-type DNA synthesis inhibition was also detected. The DNA binding of p53 is different from that of p53. ATM p53 acidification is necessary, ATM p53 is necessary, ATM p53 is necessary, ATM p53

项目成果

Shimura T, Toyoshima M, Taga M, Shiraishi K, Uematsu N, Inoue M, Niwa O.: "The novel surveillance mechanism of the Trp53-dependent s-phase checkpoint ensures chromosome damage repair and preimplantation-stage development of mouse embryos fertilized with x

Shimura T、Toyoshima M、Taga M、Shiraishi K、Uematsu N、Inoue M、Niwa O.：“Trp53 依赖性 s 期检查点的新颖监视机制确保了受精小鼠胚胎的染色体损伤修复和植入前阶段发育。

Transcription-independent suppression of DNA synthesis by p53 in sperm-irradiated mouse zygotes

• DOI: 10.1038/sj.onc.1208514
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Oncogene
• 影响因子: 8
• 作者: M. Toyoshima;T. Shimura;S. Adiga;M. Taga;K. Shiraishi;M. Inoue;Zhi-Min Yuan;O. Niwa