合成抗原を用いたシガテラ毒検定法とワクチンの開発

使用合成抗原开发雪卡毒素测定和疫苗

• 批准号: 03J07200
• 负责人: 佐々木 信也
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J07200/
• 关键词: シガトキシン; シガテラ中毒; 人工合成抗原; 抗シガトキシン抗体; モノクローナル抗体; ELISA

シガトキシン類は、珊瑚礁海域の魚介類の摂取によって引き起こされる食中毒シガテラの主要原因毒である。シガテラ中毒患者は毎年2万人以上発生している世界最大規模の食中毒である。シガトキシン類は天然から非常に微量しか採集できないため、毒性発現機構解明や中毒予防法開発の研究は立ち後れている。私は、化学合成によるシガトキシン類の供給と、抗体調製による毒魚検定法の開発を目指し、研究を開始した。まず、既知法によってCTX3CのABCD環を合成した。続いて、私が最適化した方法によりA環側鎖を導入しシガトキシン型ABCD環へと変換した、これを、リンカーを介してキャリアー蛋白質と連結して、抗体調製用ABCD抗原を合成できた。また、当研究室で合成されたシガトキシンおよびCTX3CのHIJKLM環をそれぞれ同様にキャリアー蛋白質と連結して抗原を合成した。これらの抗原を用いて、抗体の調製を検討中である。また、当研究室は、CTX3CのABCDE環およびIJKLM環を有する抗原から調製した2種のモノクローナル抗体を用いて、CTX3C検出用ELISAキットを開発した。私は、この検出キットのCTX3Cに代わる陽性コントロール試薬として、CTX3CのABCD環とIJKLM環を両方有する蛋白質コンジュゲートを合成した。このコンジュゲートのマウス急性毒性は極めて低かった(>38mg/kg)。また、上記ELISA法による検出試験で陽性を示し、その検出限界は約5ng/mLであった。従って、安全かつ高感度な陽性コントロール試薬を調製できた。続いて、実際の毒魚からのCTX3C検出への応用を目指し、モデル実験として魚の切り身に予めCTX3Cを混入した試料からの抽出・検出試験を行った。その結果、抽出物をメタノール溶液としたときに感度よく検出できた。これにより、シガテラ毒魚からのCTX3Cを検出できる可能性が示されたと言える。

The main cause of food poisoning is シガトキシンは and fish and fish species in coral reef waters. More than 20,000 people suffer from シガテラ poisoning every year, which is the world's largest case of food poisoning. The シガトキシン type is natural and very small, and it is collected in very small amounts, and the toxicity is now revealed by the organization, and the poisoning prevention method is established and the research is done. Private research, supply of chemical synthesis, antibody preparation, poison fish determination method, and research start.まず、The known method is によってCTX3CのABCD ring をsynthesisした.続いて、private optimization method によりA ring side lock を introduction しシガトキシン type ABCD ring へと変change した、これを, リンカーをsuke してキャリアーprotein とlinking して, ABCD antigen をsynthesis できた for antibody preparation.また、When the laboratory synthesized されたシガトキシンおよびCTX3CのHIJK LM ring をそれぞれ Same as 様にキャリアーprotein and linked してantigen をsynthesis した. The antigen is prepared using the antibody and the antibody is prepared.また, when the laboratory は, CTX3C のABCDE ring およびIJKLM ring を有するantigen から modulation Two kinds of のモノクローナル antibodies are used for いて and CTX3C ELISA is developed for ELISA. Private は, この検出キットのCTX3C に generation わるpositive コントロールtrial 薬として, CTX 3C's ABCD ring and IJKLM ring are made of protein. The acute toxicity of このコンジュゲートのマウス is extremely low (>38mg/kg). According to the above mentioned ELISA method, the test result is positive and the limit is about 5ng/mL.従って、SafetyかつHigh sensitivityなpositiveコントロールtest薬をmodulationできた.続いて, 実记の poisonous fish からのCTX3C検出への応用を目见し, モデル実験としThe fish is cut and the body is mixed with the CTX3C and the sample is mixed and the sample is extracted and tested.そのResults, extract をメタノール solution としたときにsensitivity よく検出できた.これにより、シガテラtoxic fish からのCTX3C を検出できるpossibility がshow されたと言える.

项目成果

Shoji Kobayashi, Babak H.Alizadeh, Shin-ya Sasaki, Hiroki Oguri, Masahiro Hirama: "Synthesis of the Fully Functionalized ABCDE Ring Moiety of Ciguatoxin"Organic Letters. vol.6, No.5. 751-754 (2004)

Shoji Kobayashi、Babak H.Alizadeh、Shin-ya Sasaki、Hiroki Oguri、Masahiro Hirama：“雪卡毒素全功能化 ABCDE 环部分的合成”有机字母。