難治性炎症疾患におけるオステオポンチン作用の分子機序の解明

阐明骨桥蛋白在顽固性炎症性疾病中作用的分子机制

基本信息

批准号：
03J50011
负责人：
森本純子
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.酵母菌体成分であるβ-glucanをオステオポンチンノックアウト(OPN-/-)マウスに静脈内投与するとOPN-/-マウスではワイルドタイプ(WT)マウスと比べ肝臓内の肉芽腫形成遷延化および肝障害が低下することを明らかにした。OPNは肉芽腫形成遷延化に関与することが示唆された。2.OPNに対する特異的抗体を用いて免疫染色を行ったところ、WTマウスの肉芽腫内においてOPN蛋白の強い発現が認められた。OPNが肉芽腫形成に重要な分子であることが示唆された。3.肝臓内に発現する様々なケモカインの発現をリアルタイムPCR法および免疫染色により検討した結果、WTマウスとOPN-/-マウス間でその発現量に差を認めなかった。OPN-/-マウスにおける肉芽腫形成遷延化能の低下は、ケモカイン産生能の低下に起因するものではないことが示唆された。4.局所リンパ節である肝リンパ節における樹状細胞,CD4T細胞,CD8T細胞の数をフローサイトメトリ-を用いて検討したところ、β-glucan投与に伴う著しい増加が認められたが、両マウス問で差は認められなかった。さらにリンパ節細胞を抗CD3抗体で刺激した後、培養上清中のIL-2およびIFN-γの産生について検討したが、両者間で差は認められなかった。5.免疫染色により肝臓内浸潤細胞(CD4T細胞,樹状細胞,マクロファージ)を検討した結果、肉芽腫瘍形成後期段階において、OPN-/-マウスではこれら浸潤細胞の数が減少していた。OPN-/-マウスでは肉芽腫瘍形成後期段階において、炎症性細胞の肝臓内浸潤が低下するために、肉芽腫形成遷延化および肝障害が低下することが示唆された。6.OPN-/-マウスでは、肉芽腫形成初期段階で肝臓内におけるIL-12およびIFN-γの産生が低下していた。また肉芽腫形成後期段階ではTNF-α産生量の低下を認めた。しかしながらIL-4およびIL-10の産生量は、両者間で差は認められなかった。OPN-/-マウスでは肉芽腫形成初期段階において、肉芽腫内のIFN-γおよびIL-12の産生量が低下するために肉芽腫形成遷延化および肝障害が低下することが示唆された。

1。我们发现，与野生型（WT）小鼠相比，β-葡聚糖（一种酵母细胞成分）被静脉内给予骨桥蛋白基因敲除（OPN - / - ）小鼠，而OPN - / - 小鼠延长的OPN - / - 小鼠延长的肉芽肿和肝损伤。有人提出OPN参与了延长的肉芽肿形成。 2。使用对OPN的特异性抗体进行免疫染色，并在WT小鼠的肉芽肿瘤中观察到OPN蛋白的强表达。有人提出，OPN是形成肉芽肿的重要分子。 3。通过实时PCR和免疫染色检查了在肝脏中表达的各种趋化因子的表达，并且观察到WT和OPN - / - 小鼠之间的表达水平差异。有人提出，在OPN - / - 小鼠中延长肉芽肿形成的能力的降低不是由于产生趋化因子的能力降低所致。 4。当使用流式细胞仪检查局部淋巴结（肝淋巴结）中的树突状细胞，CD4T细胞和CD8T细胞的数量时，对β-葡聚糖的给药观察到显着增加，但在两只小鼠之间未观察到差异。此外，研究了用抗CD3抗体刺激淋巴结细胞后，研究了培养上清液中IL-2和IFN-γ的产生，但两者之间未观察到差异。 5。我们通过免疫染色调查了肝内侵入性细胞（CD4T细胞，树突状细胞，巨噬细胞），发现在颗粒肿瘤形成的后期，OPN - / - 小鼠中浸润性细胞的数量减少了。有人提出，在OPN - / - 小鼠中，在肉芽肿肿瘤发生的后期，肝内炎症细胞的肝内侵袭减少，导致肉芽肿形成和肝损伤的减少。 6。在OPN - / - 小鼠中，在肉芽肿形成的早期阶段降低了肝脏中IL-12和IFN-γ的产生。此外，在形成肉芽肿的后期，观察到TNF-α产生的降低。但是，在两个产量的IL-4和IL-10之间没有观察到差异。有人提出，在OPN - / - 小鼠中，肉芽肿内IFN-γ和IL-12的产生减少，从而减少了肉芽肿的形成和肝损伤。