細胞分裂期におけるモーター蛋白質の機能解析

细胞分裂过程中运动蛋白的功能分析

• 批准号: 03J61534
• 负责人: 原口 景子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61534/
• 关键词: Kid; 細胞分裂; ノックアウトマウス; モーター蛋白質

Kidは分子量73kDaのタンパク質で、N末端にキネシン様モーター領域を、C末端にDNA結合領域をもつ構造からkinesin like DNA binding protein(Kid)と名付けられたクロモキネシンである。本研究の目的である、Kid遺伝子をコンディショナルに欠損するマウスの作製及び作製したマウスから樹立したKid欠損細胞株を用いた細胞分裂期におけるKidの機能解析に関して、本年度は以下ような研究実績を上げた。1)KidのマウスホモログmKidゲノム遺伝子の単離を行い、ターゲティングベクターの構築を行った。この際、ターゲティングベクターにはKid遺伝子を挟む形でLoxP配列を挿入し、Creリコンビナーゼを発現させることによりコンディショナルなKid遺伝子欠損ができるように工夫した。構築したターゲティングベクターのES細胞への導入、相同組み換えを起こしたES細胞のスクリーニングを行い、複数の相同組み換えES細胞クローンを得た。更に相同組み換えES細胞由来のキメラマウスを作製し、キメラマウスと野生型マウスとの掛け合わせからヘテロ組み換えマウスを得た。2)ヘテロ組み換えマウス同士の掛け合わせによって得られた胎児から、Kid遺伝子の両アリールがLoxP配列に挟まれたmKid遺伝子に組み換わったMEF(mouse embryonic fibroblast)を得た。また、レトロウイルスを用いてCreリコンビナーゼを発現させる系など、Kid遺伝子欠損細胞株を樹立するために必要な準備を整えた。同時に、Kid遺伝子欠損細胞株樹立後に発現させる目的で、Kidの各種変異体(リン酸化部位変異体、領域欠損変異体)をGFP融合タンパク質として発現させるベクターの構築を行った。

Kid has a molecular weight of 73kDa and a molecular structure of kinesin like DNA binding protein(Kid). The purpose of this study is to establish the functional analysis of Kid in vitro. 1)Kid's In this case, the child's genetic code is in the form of a LoxP alignment, and the child's genetic code is in the form of a loss. Construction of the same group of ES cell culture medium, the same group of ES cell culture medium. In addition, the origin of ES cells in the same group was determined by the number of cells in each group. 2) Mouse embryonic fibroblast (MEF) was obtained from mouse embryonic fibroblast (MEF). To prepare for the establishment of a defective cell line At the same time, after the establishment of the Kid gene defective cell line, the development of the target, the construction of the GFP fusion gene with various variants of Kid (different in the acidified site and different in the field).

项目成果

K.Haraguchi et al.: "Activation of β-catenin-TCF-mediated transcription by non-receptor tyrosine kinase v-Src"Biochem Biophys Res Commun. 313(4). 841-844 (2004)

K. Haraguchi 等人：“非受体酪氨酸激酶 v-Src 激活 β-联蛋白-TCF 介导的转录”Biochem Biophys Res Commun. 841-844 (2004)。

T.Moriguchi, K.Haraguchi et al.: "DREG, a Developmentally Regulated G protein-coupled Receptor containing a Conserved G protein-coupled Receptor Proteolytic Site and a Proprotein Convertase Processing Site"Genes to Cells. (In press).

T.Moriguchi、K.Haraguchi 等人：“DREG，一种发育调节的 G 蛋白偶联受体，含有保守的 G 蛋白偶联受体蛋白水解位点和前蛋白转化酶加工位点”基因到细胞。