微生物由来チャネル形成毒素による宿主特異的細胞認識機構の解明

通过微生物来源的通道形成毒素阐明宿主特异性细胞识别机制

• 批准号: 15760588
• 负责人: 山際 雅詩
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15760588/
• 关键词: Bacillus thuringiensis; Cry毒素; Jurkat; BIACORE; BBMV; リガンドブロッティング; 膜小胞共沈実験; プロテイナーゼKプロテクションアッセイ; ジゴキシゲニン標識; 殺虫特異性; Bombyx mori; HEK293

特異性の異なる2種類のCry毒素(双翅目昆虫特異的殺虫活性を示すCry4A,鱗翅目昆虫特異的殺虫活性を示すCry1Aaを用いて,BIACOREを用い,表面プラズモン共鳴を利用した.アカイエカ幼虫及びカイコより調整した中腸刷子緑膜小胞(BBMV)に対する結合実験を行った.その結果,両者は殺虫活性の有無に関係なく,カイコBBMVに結合しうることが,明らかになり,殺虫活性の決定は膜への結合の有無ではなく,膜への結合様式で決定されることが示唆された。また,ヒト培養細胞特異的細胞損傷活性を示すCytoxについて,ヒト白血病ガン細胞Jurkatにおいて,MTTアッセイを行った結果,強い細胞損傷活性がみとめられ,さらに,抗カスパーゼ抗体,抗PARP抗体によるウエスタン解析により,CytoxがJurkatのアポトーシスを誘導することが示唆された。さらにDNA断片化も観察された。さらに,プロテオミクスの手法を用いて,Cry4Aの標的昆虫であるアカイエカ幼虫よりBBMVを調整して,二次元電気泳動を行い,Cry4A陽性のスポットをゲルより切り出して,MS解析を行い,受容体候補タンパク質を探索した結果,シントロフィンαが第1候補タンパク質として示唆される結果を得ることができた。

Specificity の different な る 2 kinds の Cry toxins (diptera insect specific insecticidal activity を shown す Cry4A, lepidoptera insects insecticidal activity of specific を shown す Cry1Aa を with い て, BIACORE を い, surface プ ラ ズ モ ン resonance を using し た. ア カ イ エ カ larvae and び カ イ コ よ り adjustment し た bowel brush green film in small cell (BBM V) に す seaborne る combination be 験 を line っ た. そ の results, who struck は insecticidal activity の presence of に masato is な く, カ イ コ BBMV に combining し う る こ と が, Ming ら か に な り, insecticidal activity の decided は membrane へ の combining の presence of で は な く, membrane へ の で decided to combine others type さ れ る こ と が in stopping さ れ た. ま た, ヒ ト を culture cell specific cellular damage activity in す Cytox に つ い て, ヒ ト leukemia ガ ン Jurkat cells に お い て, determined by MTT ア ッ セ イ を line っ た results, strong い cell damage active が み と め ら れ, さ ら に, anti カ ス パ ー ゼ antibody, anti PARP antibody に よ る ウ エ ス タ ン parsing に よ り, Cytox が Jurkat アポト アポト シスを シスを induce する とが とが incite された. Youdaoplaceholder0 DNA fragmentation さらに 観 search された. さ ら に, プ ロ テ オ ミ ク ス の gimmick を with い て, Cry4A の target insect で あ る ア カ イ エ カ larvae よ り BBMV を adjustment し て, secondary yuan electric line 気 swimming を い, positive Cry4A の ス ポ ッ ト を ゲ ル よ り り cutting out し て, MS analytical を い, the capacity of body alternate タ ン パ ク qualitative を explore し た results, シ ン ト ロ フ ィ ン alpha が 1 standby タ ン パ ク qualitative と し て in stopping さ れ る results る を こ と が で き た.

项目成果

山際雅詩ら(他2名): "Functional analysis of two processed fragments of Bacillus thuringiensis Cry11A toxin"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 68(3). 1-6 (2004)

Masashi Yamagiwa 等人（另外 2 人）：“苏云金芽孢杆菌 Cry11A 毒素的两个加工片段的功能分析”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 68(3) (2004)。

Functional Analysis of Two Processed Fragments of Bacillus thuringiensis Cry11A Toxin

• DOI: 10.1271/bbb.68.523
• 发表时间: 2004-01
• 期刊: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
• 作者: Masashi Yamagiwa;Kohei Sakagawa;H. Sakai

酒井 裕, 山際雅詩: "Bacillus thuringiensisが産生する特異的細胞損傷タンパク質"日本農芸化学会誌. 77(5). 498-500 (2003)

Yutaka Sakai、Masashi Yamagiwa：“苏云金芽孢杆菌产生的特定细胞损伤蛋白”，日本农业化学学会杂志 77(5) (2003)。

山際雅詩ら(他5名): "The cytotoxicity of Bacillus thuringiensis subsp. coreanensis A2316 strain against the human leukemic T cell"Memoirs Faculty Eng. Okayama Univ.. 38(2). 97-100 (2004)

Masashi Yamagiwa 等人（其他 5 人）：“苏云金芽孢杆菌亚种 Coreanensis A2316 菌株对人白血病 T 细胞的细胞毒性”MemoirsFacultyEng.38(2) (2004)。

酒井 裕, 山際雅詩: "微生物農薬による害虫の防除と環境保全"環境制御. 25. 2-6 (2003)

Yutaka Sakai、Masashi Yamagiwa：“使用微生物农药控制害虫和环境保护”环境控制。25. 2-6 (2003)。