权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

染色体の再構成とナノ構造解析による染色体折りたたみ分子機構の解明

通过染色体重排和纳米结构分析阐明染色体折叠的分子机制

基本信息

批准号：
15770066
负责人：
吉村成弘
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770066/
关键词：
染色体クロマチン核内マトリクス原子間力顕微鏡

项目摘要

発現ライブラリのスクリーニングによるモノクローナル抗体の抗原決定・染色体より抽出したタンパク質を抗原としてハイブリドーマを作成し、54種190個のクローンを得た。・54種のうち、22個は核内の構造物を、11個は細胞骨格、7個は紡錘体、14個はその他の細胞内器官を認識した。・発現ライブラリのスクリーニングにより、10種類のハイブリドーマに関して抗原を決定した。・モノクローナル抗体(#04A)の抗原として同定された新規タンパク質は、641アミノ酸から構成され、中央部にJmjCドメイン、N末端近傍に核局在シグナル(NLS)を持つものであった。・このタンパク質にタグを付加してHeLa細胞で発現させると、核小体への局在が確認された。試験管内での高次クロマチンファイバーの再構成3kbから100kbまで長さの異なるプラスミドDNA(環状スーパーコイル状態)を調整し、これらを用いて塩透析法でクロマチンファイバーを再構成した。これを原子間力顕微鏡を用いて観察・解析し、次のような成果を得た・用いたDNAが長いほど、高い密度でヌクレオソームが形成される。・この相関関係は、負にスーパーコイルした環状プラスミドにのみみられ、直鎖状DNAや、弛緩型環状プラスミドではみられなかった。・リンカーヒストンH1を加えると、クロマチンがさらに折りたたまれて、より太いファイバー状の構造を形成される。ハイブリッドイメージング技法の確立AFM像中に、特定のタンパク質の所在をプロットするために、AFMと蛍光顕微鏡とを組み合わせたシステムを構築した。GFPを融合させたPMLタンパク質(核内マトリクスに局在)をガラス基板上で培養したHeLa細胞内に発現させ、その基板上で核マトリクスを精製したのちこれを蛍光顕微鏡とAFMとで観察した結果、PMLタンパク質が局在する部位(PMLボディー)の微細構造をAFMで観察することに成功した。

It was found that the antibody antigens were determined on chromosomes, the antigens were extracted, the antigens were extracted, and 54 kinds of 190 antigens were successfully tested. 54 maladies, 22 nuclear creations, 11 cellular skeletons, 7 skeletons and 14 maladies were identified as intracellular organs. It is necessary to determine the level of antigen in the first half of the year. The antigens of antibody (# 04A), antigens (# 04A), antigens (# 04A), Please tell me that you need to pay the HeLa cell to make sure that the nucleosome bureau is confirming the error. In the tube, the environmental pollution is reorganized into 3kb, 100kb, environmental pollution, environmental pollution, In this paper, the atomic force is used to observe and analyze, and the results are obtained by using the results of the atomic force measurement and analysis, and the results show that the DNA is very long, and the density is very high. In the first place, we need to know that the environmental conditions are different, such as the environment, the environment, the temperature, the temperature and the temperature. I don't know if you can tell me that if you don't know what's going on, you're going to have to do something about it. This is the best way to make sure that the image of the AFM is in the middle of the image, where the specific system is located, and that the AFM is located in the image. The results of GFP fusion were detected in the HeLa substrates on the substrate, the AFM micrographs on the substrates, the results of the AFM micrographs, the results of the AFM micrographs, the results of the AFM micrographs on the substrate, and the results of the detection results.